分子｜RT-PCR的阶段是什么？它有什么作用？

在之前的文章当中，我们提到了PCR的阶段，所以有朋友在后台询问我们PCR的阶段是什么，它们有什么作用，这是一个很好地问题，因为RT-PCR确实存在四个阶段，基线期、指数期、线性期和平台期。其中，基线期是PCR反应还没有结果，或者其信号值还不能超过背景值的时期，所以我们不在这次的文章中进行探讨。

在反应刚刚开始的时候，所有的试剂都是过量的，因此，在每个循环当中，我们获得的产物都会翻倍。所以，在设置为对数比例的扩增图中，我们看到这种指数式增长都是一条直线，这个阶段被称为指数期，有的时候也被称为几何对数期。

但试剂的量不会总是那么充足，所以这种翻倍并不会永远持续下去。在某些时候，试管中的试剂，引物、DNTPs等等开始变少。这个时候，反应速度开始减慢，这个阶段被称为线性期。

最后，当试剂运行了足够多的周期后，有些反应的关键成分被用完了，整个反应停了下来，这个阶段就被称为平台期。

好了，以上就是PCR反应的三个阶段，那么，它们有什么作用，我们为什么要关心平台的阶段呢？

这是因为只有一个阶段能产生高质量的定量数据，没错，就是指数期。

为了更好的说明原因，我们来看一下这个例子。在这个运行中，我们取了一个高浓度的样品，并以10倍的比例进行连续梯度稀释，而且对于每一个浓度水平，我们都进行了八次重复。

现在，让我们注意上图中黄色方框画出的区域，我们可以看到，在这个区域中，所有稀释浓度水平都是非常均匀的，和我们预期的完全一样。同时，每一个浓度水平的重复都非常精密，这意味着精密度也非常好。

但是，随着反应进入线性期，这种可预测性开始消失。我们可以看到，原先很漂亮的直线开始弯曲，完全扰乱了均匀的间隔，而且精密度也大大下降。

最后，在平台期的时候，数据全部合并在一起，已经很难分辨了。

这就是我们为什么总是希望在指数期对数据进行分析的原因，因为在这里，我们将会得到最好的结果，特别是对于定量反应来说。

那么，如何能做到这一点呢？那就要确保我们把阈值设置在指数期内，关于阈值的相关信息，大家可以参考我们之前的文章《分子：RT-PCR中的阈值是什么？》。