技术｜ELISA技术简介

酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种检测和量化复杂混合物中特定蛋白质的强大方法。该方法最初由Engvall和Perlmann（1971年）描述，使用特异性抗体可以分析包被在微孔板孔中的蛋白质样品。该技术已经彻底改变了免疫学，并在医学研究实验室中普遍使用。ELISA也有商业应用，包括在诊断和食品行业检测疾病标志物及过敏原。

ELISA方法之所以成为可能，是因为一些相关领域的科学进步。Kohler和Milstein（1975年）开发的生产抗原特异性单克隆抗体技术，可以使这些抗体被用作探测复杂蛋白质混合物或组织样品中单个分子的探针。

最初，检测是通过使用放射性同位素标记的抗体的放射免疫测定来实现的，但由于健康风险，人们寻求替代方法。Avramais（1966, 1969）和Pierce（1967）开发了将抗体与生物酶进行化学连接的方法，这些酶的活性在含有适当底物的溶液中产生可测量的信号。随着荧光技术的发展，使用荧光体标记的抗体产生信号也变得很普遍，特别是在多重阵列中。

尽管ELISA的许多变种已经被开发出来并用于不同的场合，但它们都依赖于相同的基本要素：

1.   包被/捕获：直接或间接将抗原包被在聚苯乙烯微孔板的表面。

2.   板封闭：加入不相关的蛋白质或其他分子以覆盖微孔板孔的所有不饱和表面结合点。

3.   探针/检测：用与抗原亲和结合的抗原特异性抗体进行孵化。

4.   测量信号：检测通过特异性抗体上的直接或二阶标签产生的信号。

在一个典型的旨在检测复杂蛋白质混合物中的抗原的检测中，抗原通过直接吸附或通过吸附在微孔板孔中的抗体被包被下来。板被封闭，抗原被特定的检测抗体探测。检测抗体可以直接用产生信号的酶或荧光基团标记，也可以用酶或荧光标记的二阶抗体（或Avidin-生物素化学）进行二次探查。

对于酶法检测，加入适当的酶底物。观察到的信号与样品中的抗原量成正比。两步之间的清洗确保只有特异性（高亲和力）的结合被保持下来，从而在最后一步引起信号。

图1 | ELISA方法示意图