导语 丙型肝炎病毒（HCV）是引起肝相关死亡的主要原因。据统计，全球大约有HCV 7100万慢性感染者。直接作用于抗病毒的最新治疗方法已将治愈率提高到>95%。然而据估计，由于无症状的感染状态，目前80%的感染者不知道自己是HCV病毒携带者。其中许多在出现不可逆转的临床表现比如肝硬化和肝癌之前，患者没有成功诊断并治疗，导至每年大约有400000例HCV相关死亡。 大多数HCV感染者居住在中低收入国家或地区。高昂的成本、冗长的检测时间和所需的专业技术和设备，均限制了总体诊断率。 近日，来自Glasgow大学的几个研究团队在nature communications发表了一篇题为“Paper microfluidic implementation of loop mediated isothermal amplification for early diagnosis of hepatitis C virus” 的文章。该研究团队研制出一种基于逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）的方法成功检测HCV病毒。该方法用户友好、低成本、泛基因型诊断，并且在40分钟内即给予直观的结果显示（检测试纸条）。
主要内容 1 ● 临床敏感性和特异性 HCV和许多RNA病毒一样，表现出高度的遗传多样性。研究团队采用金标准HCV RT-PCR作为比较，用一个双盲设计的实验对于HCV LAMP和HCV RT-LAMP的临床敏感性和特异性进行了分析。 结果显示，对于不同的HCV基因型，HCV LAMP和HCV RT-LAMP表现出了高度的敏感性和特异性。其中HCV LAMP和HCV RT-LAMP表现出的假阴性与HCV RT-PCR相当。HCV LAMP和HCV RT-LAMP表现出的假阳性稍逊，分别为10/100和9/100, 而 HCV RT-PCR 为0/100。
表1. 敏感性和特异性的分析 2 ● 检测时间 对于不同的HCV基因型和不同的病毒载量，HCV LAMP和HCV RT-LAMP检测阳性的检测时间略有不同，不过绝大多数都能控制在30分钟之内。
图1. HCV基因型和病毒载量对于检测时间的影响 3 ● 试纸条结果显示 研究团队采用了更为直观方便的结果显示方法——核酸检测试纸条。就像验孕试纸条一样， 一个条带意味着阴性结果，两个条带意味着阳性结果。 研究团队设计的侧向流装置由LAMP反应室、阀门、侧向流试纸条构成。设备的工作原理如图，预先使用生物素和FITC分别标记两种引物，因此反应完毕后的LAMP扩增产物带有生物素和FITC双重标记。扩增产物通过生物素与试纸条上的链霉亲和素标记物结合，并通过毛细管作用与试纸条条带上的抗FITC抗体（Ab）结合在测试线上形成一条带。任何未结合LAMP扩增产物的链霉亲和素标记物则会继续移动，并在试纸条上形成第二条生物素条带。
图2. HCV LAMP检测装置的原理图 总结 该研究团队研制的HCV LAMP检测技术具有很高的敏感性和特异性。试纸条结果显示设备成本低廉、使用简单、检测时间短，完全符合并超出了WHO的需求，为今后提高HCV诊断率打下了基础。 |
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