环介导等温扩增(LAMP)微流控

环介导等温扩增技术（Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP）是2000年由日本荣研株式会社的Notomi等人提出的一种新型核酸扩增技术。该技术依靠4-6条特异性引物和一种具有链置换活性的 DNA 聚合酶（Bst DNA聚合酶），在等温条件（60-65℃）下扩增靶序列，避免的传统PCR需要变温扩增而对精密仪器的依赖性，同时具有快速、高效、特异性强的特点。

LAMP原理视频

2004年，Hataoka研究团队设计了一块十字通道的PMMA微流控芯片用于LAMP检测前列腺特异性抗原cDNA。

环介导等温扩增具有操作简便、快捷、高效、特异性等特点，能满足微流控集成诊断系统的要求，实现两种技术的完美结合。同时微流控技术也可以为LAMP核酸检测系统提供形状、大小不同的微量密闭反应通道及微反应空间，有效克服了LAMP易产生气溶胶，造成实验污染的弊端。微流控技术可提供平行且互不干扰地微反应区，可以构成多通道环介导等温扩增诊断集成系统。

周杰等采用北京博奥晶典生物技术有限公司RTisochip-A 恒温扩增微流控芯片分析仪，基于环介导恒温扩增技术对转基因农作物样品中靶标基因进行检测。该碟式芯片共有24个样品检测孔，每个孔体积为2.2uL。检测时间为30min，该检测试剂可以大大缩短检测时间和降低检测成本。

Abkar Ahmed Sayad 等开发出一种碟式离心型微流控装置。该装置分为三层，底部PMMA层，中间压敏胶（PSA）粘合层和底部PMMA层。微流控通道通过切刻机在底层制作出混合试剂、测量、 等温扩增和检测的微流控腔室。LAMP 实验的排气和装载孔、蜡、密封材料放在微流控 CD 顶层。该系统，对添加沙门氏菌的番茄进行检测，检出限为 5×10-3 ng/uL。整个过程，从样品制备到检测，可以70min内在微流控 CD 上全自动化完成。

Zhou等运用碟式离心聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）芯片荧光 LAMP 检测法，成功实现了一类弧菌的芯片 LAMP 快速检测，检测时间仅用30min，芯片LAMP扩增较之常规LAMP扩增，具有操作简便，扩增速度快，便于携带，实时快速等优点，相对于常规LAMP 检测法耗材量大大降低。

美国Rheonix公司开发的基于微流控技术的 CARD 芯片，该芯片集成泵、阀门、微通道、反应和试剂储液池，以及通用DNA阵列。CARD芯片采用聚苯乙烯均聚物注塑而成，可以用于免疫检测和核酸检测。Chen 等可在60min内，使用 CARD 芯片提取人类免疫缺陷病毒（HIV）RNA ，20min内完成进行 RT-LAMP 检测，分析灵敏度可达每毫升 103 病毒颗粒（103vp/mL）。此外，台式 RT-LAMP 和 CARD 芯片上的分析结果显示加入病毒与结果CT值的一致性，说明CARD芯片具有与劳动密集型的台式LAMP同样的处理能力。

Dou等研发了一种PDMS-纸混合微流控装置，PDMS不用复杂的表面处理，无大型设备，将“纸”的技术引入到微流控LAMP装置中。该装置包括三层，两个PDMS层和一个玻璃载片底层。首层PDMS用于试剂递送，包含三个微通道和一个加样入口。中间PDMS层由底部的6个孔道组成，作为LAMP反应区。底层为用于支撑的玻璃载片。该装置可以在45min内检测最低为3个拷贝的脑膜炎奈瑟氏球菌。

Coelho等设计了一种T型数字微流控芯片，使用数字微流控与LAMP结合的技术扩增癌基因c-myc 0.5 ng/uL靶标DNA只需45min，反应液仅需1.54ul，远远低于台式反应技术。

Wan等为了进一步加强LAMP反应的特异性，开发了一种使用分子信使DNA探针的病原体数值微流控系统。该系统仅需1uL的LAMP反应样品。可以在40min内检测最低10个拷贝。该检测速度比传统商品定量PCR设备的快3倍。并且有效解决LAMP假阳性问题，区分特异性反应产物和非特异性反应产物。

Song等研制了一种简单易于操作，价格低廉，POCT集成式，RT-LAMP微流控芯片装置，可用于寨卡病毒检测。该装置在杯盖抽屉内集成了镁-铁反应的热源，来控制LAMP反应温度。一次性微流控芯片完成病毒核酸的捕获、浓缩、提纯、等温扩增和检测。扩增产物的检测不需要额外的仪器，采用无色结晶紫染料进行目测。整个装置可以在40min内完成口腔样本中寨卡病毒灵敏度5个单位。

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