面对突如其来的新冠疫情 核酸检测引来发展新高潮 尤其在分子诊断领域 传统核酸分子检测技术 不断蜕变和创新 从未淡出我们的视野 经历了经典PCR、实时定量PCR 再到现在的数字PCR 三个阶段 这些都离不开PCR的高温变性 低温退火和延伸 离不开精准控温的PCR仪 今天小编给你介绍一个黑科技 可以替代PCR的核酸检测技术 --重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA) RPA(Recombinase Polymerase Amplification)全称重组酶聚合酶等温扩增技术,被称为可以替代PCR的核酸检测技术。 RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最好反应温度在37°C左右。 RPA原理 重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。 |