最简单的恒温扩增PCR——RCA/RCT

小背景

滚环扩增技术，rolling circle amplification，RCA——基于DNA的扩增方法；

滚环转录技术，rolling circle transcription，RCT——基于RNA的扩增方法。

滚环扩增/转录技术是基于借鉴了自然界中环状DNA/RNA复制和转录方式开发的一种恒温扩增方法，产物为单链DNA/RNA，开发者称之为最简单的恒温PCR方法。

有两种形式：一种线性扩增；一种是指数扩增。

该系统的核心组成

引物

• 单引物：针对环状模板，进行线性扩增使用；

• 双引物：针对环状模板，在单引物的基础上，增加一个针对目标核酸序列的反向引物，进行指数扩增使用；

• 锁环探针（padlock probe）：由于滚环扩增的方法的模板必须是环状的，如果针对线性基因进行扩增，这时就需要锁环探针，该探针的两端具有同目标靶序列互补序列，当识别靶序列后，锁环探针形成带有目标靶序列的锁环。

酶

‍‍‍

• phi29DNA聚合酶

  从Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶；有强链置换和连续合成特性，且具有高保真性。

• DNA连接酶

  当锁环探针识别靶序列形成不完全锁环后，DNA连接酶将不完全锁环两端就行连接，最终形成完全环状模板。

  
  

工作原理

1、环状模板：天然环状模板或者连接形成

利用锁环探针和DNA连接酶形成闭合环模板

2、线性扩增

线性扩增模式图

3、指数扩增

指数扩增模式图

系统特点

总的来说，RCA系统以及改良系统在不同的领域都得到一定的应用。

嗯啊，了解下来，整个系统的使用的酶和引物都相对比较简单。