肝癌早期比较隐匿,患者确诊的时候往往已经到了中晚期。目前关于肝癌的早期诊断仍然是一门非常热门的科学问题,尽管联合检测、ctDNA的应用使得肝癌的早期诊断成为可能,但联合检测成本高,ctDNA成份少,异质性严重。MicroRNA(miRNA)是一类新型基因调节剂,其生理学机制复杂, 目前主要认为是通过促进靶信使核糖核酸(mRNA)的降解或抑制其翻译过程而发挥调控作用, 在细胞中具有广泛的生物学效应, 参与细胞生长、增殖、分化以及死亡等诸多过程。近期发现, miRNA可能具有癌基因和抑癌基因的作用, 且不同类型的肿瘤有其特异的miRNA表达谱。miRNA与肿瘤的发生、分化程度、耐药性及预后等密切相关。本推送主要介绍miRNA及miRNA肝癌诊断产品。
microRNA简介
miRNA是一种广泛存在于真核生物、大小约为20-25个核苷酸的内源性单链小分子RNA。研究发现miRNA调节人类1/3的基因, 成熟的miRNA生物学效应是降解或是阻遏靶mRNA的翻译, 进而参与生命过程许多的重要进程。如上所述, miRNA具有双向调控功能, 在肿瘤的发生发展的基因层面上同样具有促进或者抑制作用。下面这篇张学记老师通讯的综述详细叙述了microRNA的功能及其在检测领域的应用。
近年来研究者通过基因克隆、印迹杂交、实时荧光定量聚合酶链式反应、核酸原位杂交、基因芯片及深度测序等技术检测出一系列与肝癌的发生、发展、转移相关的miRNA。相关研究也已报道miRNA-211, miRNA-429,miRNA-302b,miRNA-214,miRNA-135a,miRNA-125a参与肝癌的发生和转移,而miRNA-183,miRNA-122,miRNA-21,miRNA-18b等在肝癌的诊断、治疗及预后中起重要作用,这些miRNA分子的发现为肝癌的早期诊断和预后提供了坚实的基础。
microRNA的优势
无创
采取血液样本进行检测,对病人的损伤较小,能够克服创伤性检测带来的风险。
稳定
在临床血清、血浆样本中,microRNA以抵抗RNA酶的形式稳定存在。
早期
循环microRNA在肿瘤早期阶段(比如癌前状态、极低肿瘤负荷的时候)就已经表现出异常,因此可以用于肿瘤高危人群的预警或者肿瘤早期检测。
简便
研究蛋白型的诊断标志物需要制备抗体,而microRNA的研究方法相对简便,发现-验证-应用的周期相对可能更短。
microRNA肝癌检测产品
microRNA检测方法目前主要有两类:(1)基于探针杂交技术的检测方法:比如Northern blotting法、纳米金标记法以及桥联同位素标记法等。(2)基于扩增反应的检测方法:比如定量PCR法(qPCR)、滚环扩增法以及新一代测序技术等。qPCR法灵敏度和精确度较高,样本需求较少,目前被广泛采用。而新一代测序技术通量高,结果准确,可定量检测未知microRNA,但是检测成本相对较高。
miRNA7™肝癌分子诊断试剂盒
miRNA7™肝癌分子诊断试剂盒是由骏实生物科技(上海)有限公司开发,产品已获NMPA认证,主要采用荧光定量PCR的方法测试7种微小核糖核酸。可有效地通过比较肝细胞肝癌患者治疗前后7种miRNA表达水平的综合变化,辅助判断疾病进程或治疗效果。每次只需0.2mL血浆即可进行监测,方便医生根据诊疗需要进行多次、动态监测,辅助判断疾病进程或治疗效果。
技术原理
磁珠特异性捕获技术可有效将7种靶标miRNA从血浆中提取(miR-21,miR-26a,miR-27a,miR-122,miR-192,miR-223,miR-801)。茎环结构引物设计的qPCR技术可完成7种miRNA的量化检测。配合全自动化荧光PCR平台完成全部操作,确保检测正确。
博奥新景miRNA检测
循环microRNA+AFP联合检测技术由博奥新景与清华长庚医院、北大人民医院、解放军总医院等8家顶级三甲医院合作研发。博奥新景是国内首个基因加蛋白肝癌联合筛查技术,microRNA结合常规的AFP等肿瘤蛋白标志物,不仅能够提高肝癌的早期诊断率,而且对肝炎、肝硬化患者也具有早期预警、预防、发现的作用,从而提高肝癌患者的生存率。通过采用该化学发光免疫分析仪检测血清AFP蛋白标志物和荧光定量PCR仪检测血浆microRNA标志物组合的方法,可将早期肝癌的检出率提高15%-20%,这种不同层次的组合检测对于肝癌早发现、早诊断、早治疗也蛮有意思的,也会对提高患者的生存率同样具有重要价值和临床意义。
具体检测原理和miRNA7™肝癌分子诊断试剂盒类似,从血浆中提取总RNA后,采用特异的茎环引物对目标microRNA进行混合反转录,然后基于高敏感性的TaqMan实时荧光定量PCR方法对microRNA进行定量。最后采用生物信息学分析评估受检者肿瘤发生风险,用于肿瘤的早期预警。其AFP检测采用另一份血清完成,使用化学发光法进行AFP的定量检测。