Enzyme-linked immunosorbent assay实验基本介绍

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酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。根据待测样品与键结机制的不同，ELISA可设计出各种不同类型的检测方式，主要以三明治法（sandwich）、间接法（indirect）、以及竞争法（Competitive）三种为主，以下为各种方法之介绍。

三明治法

三明治法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:
将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结
洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结
洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果
三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认，因此专一性相当高，但此待测抗原必须是多价抗原，如此才可获得两种以上的专一性抗体，以分别进行夹心；而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心，所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。
间接法

间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：
将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原
加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结
洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结
洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：
将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。
洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。
当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

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