实验技术干货！小鼠主动脉取材与大体油红染色步骤

生物科研实验室

主动脉，作为动物体内最粗大的动脉血管，起始于心脏左心室，途经上、右、下呈弓形走向，再沿脊柱下行，于胸腔和腹腔内分支为众多较细动脉。它是向全身输送血液的主要通道，又被称为大动脉。
一、小鼠主动脉取材过程
首先剪开小鼠皮肤及肋骨，暴露心脏，将灌注针插入心尖注入30ml生理盐水，随后剪掉右心耳。接着剪开腹部皮肤及腿部两侧，暴露腹腔。使用镊子轻轻夹起并剪掉直肠，再处理肠系膜与肝脏连接处，以及胃和脾。剪断肝脏与膈肌的连接处，剪掉食管，去除肋骨以充分暴露胸腔。锁骨亦可剪断，轻轻夹起并剪掉胸腺，注意避免损伤血管。此时，可清晰见到主动脉弓连接的三条血管。最终仅保留心脏、两个肾脏及整条血管。将小鼠置于大培养皿中，在显微镜下进行剥离。详细操作请参见下方视频：
二、大体油红染色步骤
1、样本固定从实验动物体内取下心脏及沿主动脉根部取下的整根血管，使用4%多聚甲醛固定24小时以上。
2、血管解剖使用解剖专用镊子，由一端轻轻剥离外周脂肪，直至仅剩小血管而无其他脂肪组织。沿主动脉弓三条动脉的对侧轻轻剖开血管，尾部分叉处亦需剖开。再贴着三条动脉下方剪开一小段，沿此切口分别将三条动脉剖开。
3、染色处理将剖好的血管用PBS稍作清洗，先浸入60%异丙醇3-5秒，再浸入油红染液中，于37℃下染色60分钟。取出血管后，用60%异丙醇分化血管外的背景色，此步骤需控制时间，以免血管变硬难以铺开。
4、拍照记录将染好的血管在黑色背景玻片上直接铺开，或在白色蜡板上用针固定铺开。在良好光线条件下，调整焦距和曝光，添加标尺进行拍照。
5、结果分析血管壁内的脂肪斑块呈现鲜红色，其他部位则近乎无色。
三、操作注意事项
务必从主动脉弓的对侧剖开血管，因斑块多沿颈总动脉分布，此操作可避免剪破脂肪粒。解剖血管时需轻柔操作，确保血管外脂肪剥离干净，以免在图片中难以区分斑块与外周脂肪。