PCR技术为什么一定要高温，为何不用普通DNA聚合酶？如何进行循环的？引物可以再生？

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PCR技术为什么一定要高温，为何不用普通DNA聚合酶？如何进行循环的？引物可以再生？
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PCR，全称Polymerase Chain Reaction，中文名即聚合酶链式反应。其本质是，在体外环境中，以DNA为模板，以脱氧核苷三磷酸（dNTP）为原料，在含有镁离子的缓冲体系中，利用DNA聚合酶特异性的扩增特定的DNA，主要包含变性，退火，延伸三个过程。
1.为什么高温。DNA的扩增在体内环境中进行复制，是由多种酶参与。由于DNA在体内呈双螺旋状态甚至还有超螺旋形式的三级结构，因此DNA在体内复制时首先需要DNA拓扑异构酶解开超螺旋，再由DNA解旋酶解开双螺旋结构，而后DNA聚合酶等识别并结合启动复制。
而在体外环境中，双螺旋DNA具有一种特殊的物理性质，即变性复性。随环境温度升高双螺旋DNA会自主的解开自身的双螺旋结构成为两条单链，这个过程成为变性；而后温度下降也会再次结合恢复成双螺旋结构。这个特性使得DNA的体外扩增的实现有了可能。
2.为什么不用普通DNA聚合酶。大部分的酶随温度的增加其活性也随之增加，但到了一定的高温，酶的蛋白质结构受到影响，不可逆的失活，因此常规的DNA聚合酶无法撑过体外的DNA变性升温过程，所以最开始每一轮变性结束后加入酶液。
科学家们在一处火山地带的生物群中发现一种细菌，即水生栖热菌 Thermus Aquaticus （ Taq ），从中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶，即Taq酶。这种酶因为具有热稳定性，可以撑过95℃的DNA变性区间，恢复到55-60℃的退火以及70℃左右的延伸仍然具有DNA聚合酶活性。
这种酶的应用使得PCR过程只需要在一开始加入酶液，不用每轮扩增添加。
3.如何进行循环。
4.引物可再生问题。引物不可再生，是体系配置时统一加进去，根据DNA复制的特点，添加5'端配对的前向引物（Forward引物，F'引物）和3'端配对的反向引物（Reverse引物，R'引物）。引物浓度有一定要求，太低影响产物产量，太高会形成引物二聚体阻碍扩增。