流式专题（五） | 细胞增殖和细胞周期检测

Rose

细胞增殖分析
在流式上，细胞增殖可以使用几种不同的方法和标记物测量。这些测定方法使用与增殖有关事件，例如将胸苷类似物（BrdU或EdU）掺入复制DNA中，对遗传性永久染料（CFSE）的子代追踪以及与增殖有关的抗原的表达（Ki67，PCNA ）。


处于蓝色部分阶段的细胞，就处于生长期，会被标记到Ki-67的阳性率里面。阳性率高，说明越多的细胞处于这个生长期。

细胞周期分析
细胞周期分析测定包括用饱和量的DNA结合染料对DNA染色。在大多数情况下，将细胞用70％的乙醇溶液固定，使细胞破膜，然后用染料（PI，7AAD，DAPI）染色。有些染料可以进入活细胞标记DNA而不会损害细胞，例如Hoescht33342。在这种类型的分析中，样品以线性坐标、低流速采集，然后使用倍体建模软件（如Modfit等）进行分析，确定细胞周期阶段。
细胞周期的分析，以HeLa细胞为例。首先用前向 (FSC) 和侧向 (SSC) 圈出细胞群，再用荧光通道的W (宽度)/A (面积)去除粘连细胞，最后用荧光通道的柱状图分析细胞周期。图中所标a、b和c分别代表G0/G1期细胞、S期细胞和G2/M期细胞。



固定细胞PI染色法检测细胞周期



活细胞Hoechst 33342染色法检测细胞周期

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