常见的内参类型包括哪些？如何挑选合适的内参？

生物科研实验室

一、常见内参类型1、全细胞或胞质内参GAPDH：分子量约36kDa，是一种广泛存在的蛋白，适用于多种细胞类型。
β-肌动蛋白：分子量约42kDa，作为经典的持家蛋白，在各种组织中表达稳定，常被用作内标。
β-微管蛋白：分子量约55kDa，也是常用的内标之一。
2、亚细胞器内参核膜内参：如核纤层蛋白B1（Lamin B1），分子量约66-72kDa。
核内蛋白内参：如组蛋白H3，分子量约17kDa。
膜内参：如钠/钾离子转运ATP酶α1肽（ATP1A1），分子量约110kDa。
线粒体内参：如细胞色素C氧化酶亚基IV（COX IV），分子量约17-20kDa。
3、外周全血/血浆/血清内参白蛋白：分子量约77kDa，可作为全血/血浆/血清内标蛋白。
二、如何挑选合适的内参？在进行蛋白质研究时，选择恰当的内参至关重要。首先要考量靶蛋白的分子量，通常需与所选内参蛋白分子量相差约5kDa，以确保精确性。此外，还需考量靶蛋白的表达位置，如胞质、胞核、核膜或线粒体等，选择与靶蛋白表达位置一致的内参蛋白才能提高结果的可靠性。
不同组织和细胞具有特异性，因此内参的选择也应根据实际情况。例如，对于脂肪组织，β-肌动蛋白的表达量较低，不适合作为内参；在血红细胞样本中，可以选择结构蛋白作为内标替代常用内参；而在诱导后样本或检测磷酸化等修饰性抗体时，选择结构蛋白作为内参更为恰当。
挑选合适的内参对于实验的准确性和可信度至关重要。以下是选择内参时应考量的几个关键因素：
1. 样本物种来源：首先需考虑实验样本来源于何种物种。对于哺乳动物组织或细胞样本，常用的内参包括β-肌动蛋白、β-微管蛋白、GAPDH等。植物样本可能需要选择如植物肌动蛋白、Rubisco等作为内参。
2. 靶蛋白分子量：内参蛋白的分子量应与靶蛋白的分子量相差至少5kDa以上，以确保在凝胶电泳和Western Blotting中能够清晰区分靶蛋白和内参的条带。
3. 细胞定位：根据靶蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如，全细胞或细胞质蛋白检测时可以选择β-肌动蛋白、β-微管蛋白、GAPDH等；核蛋白检测时可能选择核纤层蛋白、组蛋白H3等作为内参。
4. 实验条件：内参的选择还需考虑实际的实验条件和样品的前处理。在某些特殊条件下，一些内参蛋白的表达可能会发生变化，从而影响其作为内参的稳定性和可靠性。例如，在缺氧或糖尿病等条件下，GAPDH的表达可能会增加，因此可能不适合作为内参。
5. 组织特异性：不同的组织可能需要选择不同的内参。例如，肌肉组织中可能需要选择特定的肌动蛋白亚型作为内参，而在非肌肉组织中则可能选择β-肌动蛋白等。
6. 内参的表达稳定性：理想状态下的内参应在各种实验条件下，各种类型的组织和细胞中恒定表达，且表达量稳定。
7. 抗体特异性和交叉反应：用于检测内参的抗体应具有高特异性和灵敏度，以避免非特异性结合和交叉反应，这可能会影响对靶蛋白的准确量化。