实验成功关键一步：生物样本的前处理方法汇总

生物科研实验室

在基础科学研究中，生物样本的前处理环节举足轻重。它不仅对实验结果的精准度和可信度产生直接影响，还能大幅提升数据分析的效率与品质。通过标准化的前处理步骤，我们能最大限度地降低样本污染和变异的风险，确保所获取数据的有效性。今日，让我们一同探讨学习常见的样本前处理方法！

一、样本采集
Ⅰ 细胞样本
对于贴壁细胞，需利用胰蛋白酶或细胞刮刀处理后转移至离心管；悬浮细胞则直接吸取至EP管。随后，在4℃条件下，以1000×g的离心力，离心10分钟以收集细胞。接着，使用预冷的PBS溶液清洗细胞，同样在4℃条件下，以1000×g的离心力，离心10分钟，去除上清液，此过程可重复2-3次。

小贴士：在采集前，需确保细胞状态良好，密度一般控制在70-90%。同时，要保证EP管内的细胞数量不少于10^6个。
Ⅱ 血清/血浆
血清的采集：将新鲜血液注入EP管，于室温（或37℃）下静置1小时，待血液凝固并分层后，在4℃条件下，以2000×g的离心力，离心10分钟，收集上层淡黄色的液体即为血清。

血浆的采集：将新鲜血液注入抗凝管（通常为EDTA或肝素抗凝管），在4℃条件下，以2000×g的离心力，离心10分钟，收集上层淡黄色的液体即为血浆。（血样采集后，若置于室温下，需在1小时内进行离心；若置于冰上，则需在2小时内进行离心）。
小贴士：正常的血清和血浆应为淡黄色或无色透明液体，若出现红色，则表明存在溶血现象，此类样本通常不建议使用。
Ⅲ 组织样本
动物组织：取0.02-0.2克新鲜动物组织块，用预冷的PBS溶液（0.01M，pH7.4）或生理盐水进行漂洗，以去除血液，然后用滤纸吸干水分，并进行称重。

植物组织：取0.02-0.5克新鲜植物组织块，用预冷的生理盐水进行漂洗，滤纸吸干水分后称重。

二、样本提取
Ⅰ 机械法：
  1. 超声波破碎（主要适用于细胞和菌体）
① 选用恰当的超声波破碎设备：确保设备的振动频率在15-25千赫之间，并选用大小合适的探头；

② 将细胞悬浮于相应的裂解液中，以确保细胞充分分散；

③ 为防止在溶液中产生气泡，需将超声探头完全浸入液面以下，并在不接触容器的前提下尽可能靠近底部；

④ 调整超声波的强度和时间，通常采用超声5-10秒、暂停5-10秒，多次重复的方法进行。对于较难破碎的样本，可适当增加超声次数和时长。小贴士：建议在冰上进行操作，若超声后液体变得清澈透明，则表示裂解较为彻底。若超声过程中出现黑色物质，则表示功率过大。

  2. 匀浆处理（主要适用于组织样本）
① 手动研磨：将样品切成小块，在冰浴中保持低温。使用研棒或手动研磨设备将样本充分研碎，研磨数十次。对于较难研磨的样本，可适当延长研磨时间直至充分研碎。

② 机器研磨：将样品和裂解液一同放入研磨腔室，确保不超过设备的最大容量，以获得最佳效果。根据样品类型设置合适的研磨速度和时间。通常建议从低速开始，以避免样品过热。时间和速度可根据样品特性进行调整。（若使用无制冷功能的匀浆机，建议提前将配件和裂解液预冷。）
Ⅱ 反复冻融法
① 将含有细胞悬液的离心管放入液氮中或-80℃的冰箱中冷冻约10-30分钟。

② 将离心管放入37℃的水浴中解冻，直至完全融化。此过程可通过手动摇晃来加速解冻。

③ 重复冻融循环3-5次，每次冻融后均需轻轻混合均匀，以确保细胞壁被充分破裂。

生物样本的精细处理是实验成功的关键所在，也是每位实验人员必须掌握的技能。希望大家能在实际操作中灵活运用上述样本前处理方法，从而获得理想的实验样本。关注我们，一同轻松高效地开展科研工作。