为什么别人的切片染色做的那么好看？切片染色“独门绝技”分享

生物科研实验室

在进行病理分析时，切片染色无疑是至关重要的一环。尽管大家都曾尝试过，但成果却千差万别。为何别人做出来的切片染色那么好看，而自己总是做不好？
今天小编给大家分享一些切片染色的独门绝技。
石蜡切片技巧  1. 样本取材  • 迅速行动，避免组织细胞成分与结构的改变。  • 轻柔操作，最大限度减少样本损伤。
  2. 样本固定  • 固定液需即配即用，以防氧化还原反应导至失效。配置后置于阴凉避光处保存。  • 确保固定液充足（通常为样本体积的20-30倍），并根据组织含水量适时更换新液。  • 固定完成后，密封容器并标记，以备后续使用。  • 选择适合组织类型的固定液，因其直接影响切片染色效果。
  3. 脱水处理  • 在带盖玻璃瓶中完成脱水过程。  • 更换高浓度脱水剂时，保持样本位置不变。  • 控制每级脱水时间，避免过长。  • 如需过夜，可将样本置于70%乙醇溶液中。  • 确保脱水彻底，为透明步骤打下良好基础。
  4. 透明操作  • 使用透明剂时，随时盖紧瓶盖，防止水分进入。  • 快速更换透明剂，避免吸收湿气。  • 若出现白色雾状，说明水分未脱净，需重新脱水后再透明。
  5. 透蜡步骤  • 在低温下进行，确保石蜡不凝固。  • 保持透蜡温度稳定，避免波动。  • 迅速操作，防止组织变硬、变脆或收缩。
  6. 切片技巧  • 操作前锁定手轮，用护刀罩保护刀刃。  • 调整样本位置，使其与刀刃平行。  • 匀速转动手轮进行切片，遇到硬组织时减慢速度。  • 休息或更换样本时，务必锁定手轮并遮盖刀刃。
冰冻切片技巧  1. 包埋剂用量：适量为宜，过多过少均影响冷冻效果。  2. 预冷冻处理：先在托架上挤少量胶预冻30秒，再放置组织并加胶冷冻。  3. 冷冻温度调整：根据组织类型调整温度，避免过高或过低。  4. 载玻片存放：室温保存即可，无需冷冻。  5. 切片刀片：保持锋利，切片质量下降时及时更换。采用舒适姿势，提高操作稳定性。  6. 切片辅助：使用刷子帮助取下切片。  7. 切片技巧：持续均匀转动切片机，以获得更佳切片效果。
染色种类繁多，机器染色效果更佳。以下列举几种常见染色步骤：
HE染色步骤  1. 切片经二甲苯三次脱蜡，每次5分钟。  2. 无水乙醇两次处理，每次1分钟，随后95%、85%乙醇各1分钟。  3. 自来水冲洗1分钟，苏木精染液5-10分钟。  4. 自来水冲洗后，1%盐酸酒精分化数秒，再次冲洗。  5. 伊红染液1-3分钟，自来水冲洗。  6. 95%、无水乙醇依次处理，最后二甲苯三次透明，每次1分钟。  7. 树脂封片完成。
天狼星红染色步骤  1. 石蜡切片脱蜡至水。  2. 天狼星红染液浸泡1小时。  3. 流水冲洗后，0.5%醋酸分化30秒。  4. 无水乙醇三次处理，每次30秒，二甲苯三次，每次1分钟。
PAS染色步骤  1. 石蜡切片脱蜡至水。  2. 过碘酸氧化20分钟，蒸馏水冲洗3分钟。  3. Schiff染液40分钟，蒸馏水冲洗1分钟。  4. 苏木素5分钟，蒸馏水冲洗2分钟。  5. 盐酸酒精处理1秒，蒸馏水冲洗2分钟。  6. 蓝化液处理5秒，无水乙醇、二甲苯依次处理。
MASSON染色步骤  1. 石蜡切片脱蜡至水。  2. 苏木素5分钟，盐酸酒精处理10秒。  3. 蓝化液10秒，蒸馏水冲洗2分钟。  4. 丽春红5分钟，0.2%冰醋酸1分钟。  5. 1%磷钼酸1分钟，苯胺蓝1分钟。  6. 0.2%冰醋酸1分钟，无水乙醇、二甲苯依次处理。