汇总实验室常用染色液的制备方法

生物科研实验室

01碘-碘化钾（I2-KI）溶液碘-碘化钾（I2-KI）溶液，作为植物组织化学测定的关键试剂，能有效将淀粉染成蓝紫色，蛋白质呈现黄色。
配制方法：取碘化钾2g，先溶解于少量蒸馏水中，完全溶解后加入碘1g，充分振荡至溶解，稀释至300ml蒸馏水，储存于棕色玻璃瓶中。使用时，建议稀释2至10倍，以避免染色过深，确保染色效果更为理想。
#02苏丹Ⅲ染色剂苏丹Ⅲ（SudanⅢ或Ⅳ）染色剂，能够显著将木栓化、角质化的细胞壁以及脂肪、挥发油、树脂等成分染成红色或淡红色，是知名的脂肪染色剂。
配制方法：(1) 将苏丹III或苏丹Ⅳ干粉溶于95%酒精10ml，过滤后加入甘油10ml；(2) 另一方法是将苏丹III或IV先溶解于50ml丙酮，再加入70%酒精50ml；(3) 亦可制备苏丹III的70%乙醇饱和溶液。
#031%醋酸洋红酸性染料1%醋酸洋红（Aceto Carmine）酸性染料，特别适用于压碎涂抹制片技术，能将染色体染成深红色，而细胞质则呈现浅红色。
配制方法：将洋红1g溶解于45%醋酸100ml中，加热煮沸约2小时，期间需适时补充蒸馏水以保持原体积，冷却后过滤，再加入4%铁明矾溶液1至2滴（注意勿过量，以防沉淀产生），最后保存于棕色瓶中备用。
#04改良苯酚品红染色液 改良苯酚品红染色液（Carbol fuchsine），一种高效的核染色剂。
配制方法：首先制备三种基础原液，进而调配成染色液。原液A：将3g碱性品红溶解于100ml70%酒精中。原液B：取10ml原液A，与90ml 5%石炭酸水溶液混合。原液C：量取55ml原液B，加入6ml冰醋酸及6ml福尔马林（38%甲醛）。（注意：原液A与C可长期存储，而原液B需在两周内使用完毕）
染色液配制：取10至20ml C液，加入80至90ml 45%冰醋酸，并添加山梨醇适量（具体量未详，需根据实际操作调整），调配成10%至20%浓度的石炭酸品红液。此液需放置两周后方可使用，以达到最佳染色效果（即时使用可能导至着色不佳）。
适用范围：该染色液特别适用于植物组织的压片与涂片法，能令染色体呈现深着色，且保存性良好，有效期可达2至3年。山梨醇作为助渗剂，同时有助于稳定染色液；若无山梨醇，虽仍可染色，但效果会有所减弱。
#05中性红溶液中性红（neutral red）溶液，用于细胞液泡的染色，可辅助判断细胞活性。
配制方法：将适量中性红溶解于100ml蒸馏水中，使用前需稀释约10倍。
#06曙红Y酒精溶液曙红Y（亦称伊红，eosin Y）酒精溶液，常与苏木精配合使用，能将细胞质染成淡红色，起到衬托染色的作用。
配制方法：将适量曙红溶解于100ml 95%酒精中。此外，在进行95%酒精脱水时，可加入少量曙红溶液，以便于后续的包埋、切片、展片及镜检过程中材料的识别。
#07钌红染液钌红（ruthenium red）染液，专为细胞胞间层设计的染料，配制后不易长时间保存，建议即配即用。
配制方法：取钌红5~10mg，溶解于25至50ml蒸馏水中。
#08龙胆紫龙胆紫（gentian violet），一种酸性染料，特别适用于细菌的涂抹制片。
配制方法：使用0.2~1g龙胆紫，溶解在100ml蒸馏水中。
#09苯胺蓝溶液苯胺蓝（aniline blue）溶液，同样为酸性染料，对纤维素细胞壁、非染色质结构、鞭毛等具有优异的染色效果，尤其适用于丝状藻类的染色。此外，它常与真曙红或番红结合使用，进行双重染色。
配制方法：将1g苯胺蓝溶解于100ml 35%或95%的酒精中。
#10间苯三酚溶液间苯三酚（phloroglucin）溶液，用于木质素的检测。配制方法：取5g间苯三酚溶解在100ml 95%的酒精中。注意，当溶液呈现黄褐色时，即表示已失效。
#11橘红G酒精溶液橘红G（orange G）酒精溶液，作为酸性染料，主要用于细胞质的染色，常作为二重或三重染色的组成部分。
配制方法：取1g橘红G，溶解于100ml 95%的酒精中。
#12番红番红（safranin O），一种碱性染料，特别适用于木化、角化、栓化细胞壁的染色，同时能将细胞核中的染色质、染色体以及花粉外壁等染成醒目的红色。此外，它还能与固绿、苯胺蓝等进行双重染色，或与橘红G、结晶紫进行三重染色。
配制方法：(1) 番红水溶液：取番红0.1或1g，溶解于100ml蒸馏水中。(2) 番红酒精溶液：使用0.5或1g番红，溶解在100ml 50%（或95%）酒精中。(3) 苯胺番红酒精染色液：先配制甲液（5g番红+50ml 95%酒精）和乙液（20ml苯胺油+450ml蒸馏水），然后将两者混合，充分摇匀并过滤后使用。
#13固绿固绿（fast green），亦称快绿溶液，是一种酸性染料。它能迅速将细胞质和纤维素细胞壁染成鲜亮的绿色，因此需严格控制着色时间。
配制方法：(1) 固绿酒精液：将0.1g固绿溶解于100ml 95%酒精中。(2) 苯胺固绿酒精液：取1g固绿、100ml无水酒精和4ml苯胺油，混合后充分摇匀，并过滤后使用。为确保最佳效果，建议现配现用。
#14苏木精染液苏木精（hematoxylin）染液，作为植物组织制片中广泛应用的染料，源自苏木科植物苏木的心材提取。它不仅是强大的细胞核染料，还能分化出多种颜色。以下介绍海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，亦称铁矾苏木精染色液的配方。
配方：甲液（媒染剂）：含硫酸铁铵（铁明矾）2~4g，溶解于100ml蒸馏水中（建议临用前配制，保持新鲜）。乙液（染色剂）：由0.5~1g苏木精、10ml 95%酒精及90ml蒸馏水组成。配制方法：苏木精先溶于酒精中，瓶口以双层纱布包扎，促进充分氧化（通常需室内放置两个月后方可使用）。加入蒸馏水后，紧塞瓶口，置于冰箱中可长期保存。
使用说明：切片需先经甲液媒染，并充分水洗后，再以乙液染色。染色后稍经水洗，再用另一瓶甲液分色至适当程度。铁矾苏木精染液是细胞学上染细胞核内染色质的优选染料，但务必注意，甲液与乙液在任何情况下均不得混合。
#15亚甲基蓝染液亚甲基蓝染液，常用于细菌、活体细胞等的染色。
配制方法：将适量亚甲基蓝溶解于100ml蒸馏水中即可。
#16詹纳斯绿B染色液詹纳斯绿B（Janus green B）染色液配制方法：将适量詹纳斯绿B溶解于100ml蒸馏水中，配成饱和水溶液。使用时需根据材料不同进行适当稀释。
#17硫堇染色液硫堇染色液配制方法：取适量硫堇（亦称劳氏青莲或劳氏紫）粉末，溶解于100ml蒸馏水中即可使用。使用时，需用微碱性自来水或1% NaHCO3水溶液封片，以呈现多色反应。
#18黑色素液黑色素液配制方法：取水溶性黑素10g，加入100ml蒸馏水，并加入适量甲醛（福尔马林）。此液可用作荚膜的背景染色。
#19墨汁染色液墨汁染色液配制方法：将40ml国产绘图墨汁通过多层纱布过滤，加入2ml甘油混合均匀后，进行水浴加热。随后加入2ml液体石炭酸，搅拌均匀，冷却后备用。此液同样适用于荚膜的背景染色。
#20吕氏美蓝染色液吕氏(Loeffier)美蓝染色液配制方法：A液由美蓝（methylene blue，甲烯蓝）与30ml 95%乙醇组成；B液成分未详述。将A液与B液混合即可，用于细菌的单一染色，且可长期保存。根据需要，可将其稀释为1∶10或1∶100的比例使用。
#21革兰氏染色液革兰氏染色液配制方法：(1) 结晶紫液：将20ml结晶紫乙醇饱和液（2g结晶紫溶于20ml 95%乙醇中）与80ml 1%草酸铵水溶液混合，放置24小时后过滤备用。此液不易保存，出现沉淀需重新配制。(2) 芦戈(Lugol)氏碘液：将1g碘与2g KI溶于少量蒸馏水中，完全溶解后加蒸馏水至300ml。配成后贮于棕色瓶内，变浅黄色仍可使用。(3) 95%乙醇用于脱色，脱色后可选择以下(4)或(5)进行复染。(4) 稀释石炭酸复红溶液：取10ml碱性复红乙醇饱液（1g碱性复红，10ml 95%乙醇，90ml 5%石炭酸）与90ml蒸馏水混合。(5) 番红溶液：将适量番红O（safranine O，沙黄O）溶于100ml95%乙醇中，密闭保存于棕色瓶。使用时取20ml与80ml蒸馏水混合即可。这些染色液配合使用，可区分革兰氏染色阳性(G+)细菌（呈蓝紫色）和阴性(G-)细菌（呈淡红色）。
#22齐氏石炭酸复红液齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：配制方法：将碱性复红溶于10ml 95%乙醇中作为A液；另取100ml某溶液作为B液（具体成分未详）。将A液与B液混合即成所需染色液。
#23姬姆萨染色液姬姆萨(Giemsa)染色液配制方法：(1) 贮存液制备：取适量姬姆萨粉，与33ml甘油及33ml甲醇混合。首先，将姬姆萨粉研细，然后逐滴加入甘油并继续研磨，最后加入甲醇。将混合物置于56℃环境中1至24小时后即可使用。(2) 应用液配制（临用时）：取1ml贮存液，加入19ml pH值为7.4的磷酸缓冲液，混合均匀即成。另外，也可按贮存液与甲醇1∶4的比例配制成染色液。
#241%瑞氏染色液1%瑞氏(Wright's)染色液配制方法：称取6g瑞氏染色粉，置于研钵内磨细。在研磨过程中，不断滴加甲醇（总量为600ml），并持续研磨至溶解。将过滤后的染液贮存一年以上方可使用，且保存时间越长，染色色泽越佳。