实用收藏！ELISA实验常见标本的采集处理及保存方法

生物科研实验室

ELISA（酶联免疫吸附测定）实验常见标本的采集处理及保存方法对于确保实验结果的准确性和可靠性至关重要。以下是对血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织匀浆液以及尿液、唾液等其他液体生物样本的采集处理及保存方法的详细介绍。PART 01样本的收集与处理01血清
  • 收集：使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集静脉血。
  • 处理：将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。随后，在4℃条件下以1000×g离心20分钟，仔细收集上清液作为血清样本。
  • 保存：建议将血清分装多份，并保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。
  • 注意事项：采血过程中应避免溶血，以防止红细胞裂解时释放的具有过氧化物酶活性的物质干扰ELISA检测结果。同时，应避免细菌污染，以免导至假阳性结果。02血浆   • 收集：使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本。常用的抗凝剂包括EDTA、肝素钠或枸橼酸钠等。
  • 处理：标本采集后30分钟内，在4℃条件下以1000×g离心15分钟，取上清液作为血浆样本。
  • 保存：将血浆分装多份，并保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。
  • 注意事项：避免使用溶血或高血脂的标本，以免影响检测结果。同时，需仔细阅读ELISA试剂盒说明书，检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。03细胞培养上清
  • 收集：直接收集细胞培养板或细胞悬液中的上清液。
  • 处理：将上清液转移到离心管中，在4℃条件下以1000×g离心20分钟，以除去细胞碎片及杂质。
  • 保存：将处理后的上清液分装多份，并保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。04细胞裂解液
  • 收集：使用胰酶消化细胞后，收集细胞悬液。
  • 处理：经过离心、洗涤后，用预冷的PBS或细胞裂解液重悬细胞。通过反复冻融或超声破碎等方法使细胞充分裂解。然后，在4℃条件下以10000×g离心10分钟，取上清液作为细胞裂解液样本。
  • 保存：将细胞裂解液分装多份，并保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。05组织匀浆液
  • 收集：取新鲜组织样本，用PBS冲洗去除表面杂质。
  • 处理：将组织块剪碎后，按一定比例加入预冷的PBS（含蛋白酶抑制剂）进行匀浆。匀浆过程需在冰上或冰浴中进行。匀浆后，在4℃条件下以5000×g离心5~10分钟，取上清液作为组织匀浆液样本。
  • 保存：将组织匀浆液分装多份，并保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。06尿液、唾液等其他液体生物样本
  • 收集：使用无菌管收集尿液、唾液等液体生物样本。
  • 处理：在4℃条件下以1000×g离心20分钟，以除去沉淀物或悬浮物。
  • 保存：取上清液进行检测或分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。PART 02样本与试剂盒的保存01样本保存
  • 短期保存：样本收集后如在一周内进行检测，可置于4℃保存。
  • 长期保存：若不能及时检测，请按一次使用量进行小份分装，并保存在-20℃（1个月内检测）或-80℃（半年内检测），以避免反复冻融对样本造成损害。
  • 注意事项：确保样本中不含NaN3等可能抑制HRP活性的物质，以防止假阴性结果的出现。02试剂盒保存
  • 储存温度：ELISA试剂盒的有效期通常为6个月，储存温度应控制在2-8℃。
  • 保存方法：一周内使用的试剂盒可整体存储于4℃。若需长时间存放或多次使用，请及时拆开外包装并根据试剂盒内说明书要求分别保存各组分。通常，酶标板、标准品冻干粉、浓缩生物素化抗体或浓缩酶结合物等应放置在-20℃保存；其他组分如缓冲液、洗涤液等可放在4℃存放。建议将拆分保存的各组分用自封袋装好并按货号做好标记以便取用。