【实用干货】IF-FISH 蛋白与DNA或者RNA共定位

会里很

想要知道核酸与蛋白质同时表达情况不知道做什么实验的话，就来看看IF和FISH联用吧！
荧光原位杂交FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是：如果待检测的细胞或组织切片上的靶核酸与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶核酸与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素或直接标记荧光素，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应或直接经荧光检测体系在镜下对待测核酸(mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA)进行定性、半定量或相对定位分析的一种实验方法。

免疫荧光(IF)：以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术。用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体。

应用：通过原位杂交及免疫荧光双染，可以在组织细胞中对核酸分子和蛋白指标同时进行共定位、以及定性分析，可以用来从共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

需要客户提供：
组织：固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）组织样本，常温运输；
细胞：新鲜活细胞样本（大于106）样本，常温运输；
切片：石蜡切片，常温运输；冰冻切片以及细胞爬片，涂片-20℃运输；
实验信息：基因名称及ID；
实验材料：适用于免疫荧光的一抗，原装抗体不低于20ul；

简要实验步骤：



实验注意事项：
1. mRNA为检测对象时，需严格要求实验环境经无RNA酶处理；
2. FISH切片保存时间较短，应尽快取图；
3. 不同的抗体与原位杂交进行双标时，可能会有影响，必要时进行一定的实验步骤调整，以避免相互之间的影响。
那这么好的实验方法怎么会没有文章支撑呢，特意找到一篇提供给大家进行参考~



RNA双染(IF/FISH)文献：Optimized RNA ISH, RNA FISH and protein-RNA double labeling (IF/FISH) in Drosophila ovaries

文献中提供的实验流程：



IF-FISH检测结果图



原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/360106709