不同采血部位及放置时间对样品检测高敏C反应蛋白的影响

临床医师

上海市宝山区张庙街道长江路社区卫生服务中心     彭海维，方宗君，杨容

       摘要：目的　探讨静脉抗凝血样品与末梢血样品检测高敏Ｃ反应蛋白（ｈｓ-ＣＲＰ）结果的差异程度及上述样品放置不同时间对ｈｓ-ＣＲＰ测定结果的影响。方法　采用散射比浊法分别检测静脉抗凝血与末梢血２种样品各８４例在即刻及４℃放置２４ｈ、７ｄ３个时间段的ｈｓ-ＣＲＰ含量，并进行比较分析。结果　静脉抗凝血与末梢血的精密度分别为２．３３％、２．３０％，均在允许误差范围内。以静脉抗凝血样品即刻ｈｓ-ＣＲＰ检测值为参比，末梢血样品即刻检测值与其比较偏差最小（Ｐ＞０．０５），相关性最好；而４℃放置２４ｈ，静脉抗凝血样品及末梢血样品相对偏差均增大，放置７ｄ时偏差明显增大（Ｐ＜０．０５），相关性均明显下降。结论　静脉抗凝血与末梢血即刻检测ｈｓ-ＣＲＰ两者间具有良好的相关性，随着放置时间的延长其检测值差异逐渐增大，４℃放置７ｄ时偏差已超出分析要求。
       关键词：高敏Ｃ反应蛋白；采血时间；差异

       Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）是一种肝脏分泌的急性时相反应蛋白，生理状态下含量甚微，在急性感染、创伤、组织坏死时其血液中浓度急性升高。高敏Ｃ反应蛋白（ｈｓ-ＣＲＰ）是使用了具备更高灵敏度的检测方法所获得的结果。众多研究表明，ＣＲＰ轻度增高与动脉粥样硬化、脑卒中和周围血管病相关，是独立的危险因子。ｈｓ-ＣＲＰ在冠心病、中风、周围血管栓塞等疾病预测中发挥重要作用，对于心血管疾病危险性评估具有重要意义。目前，临床上常选用即时检验（ＰＯＣＴ）设备来检测ｈｓ-ＣＲＰ，通常以新鲜手指末梢血作为样品。对于大中型医院来说，一般都有大型全自动生化分析仪，采集静脉血后直接上机检测ｈｓ-ＣＲＰ；然而对于没有大型全自动仪器的基层小型医院，一些检测项目只能由小型ＰＯＣＴ设备完成。然而关于静脉抗凝血直接用于ＰＯＣＴ设备检测ｈｓ-ＣＲＰ，与末梢血之间是否有差异的报道较少。因此，我们评估了末梢血与静脉抗凝血的差异程度以及样品存放时间对检测结果的影响。

材料和方法

一、对象

       收集２０１２年４月至７月门诊患者８４例，其中男３６例，女４８例，年龄１４～８５岁。用含有ＥＤＴＡ-Ｋ２抗凝剂的真空管采集患者静脉血２ｍＬ，同时采集该批患者的手指末梢血２０μＬ加入含有８００μＬＣＲＰ样品处理液的样品管中。

二、仪器与试剂

       采用国赛特定蛋白分析仪（散射比浊法），原装ｈｓ-ＣＲＰ测定试剂。

三、测定方法

       将采集的８４例抗凝静脉血充分混匀，根据试剂盒使用说明书要求取２０μＬ全血加入８００μＬＣＲＰ样品处理液中，待红细胞完全溶解（１０ｓ）后混匀，吸取４０μＬ加入比色杯中按操作规程进行检测，其余抗凝血放入４℃冰箱保存（所有样品均加盖），分别于２４ｈ、７ｄ再取出检测。
       将８４例已加入ＣＲＰ样品处理液的手指末梢血样品吸取４０μＬ加入比色杯中，按操作规程进行检测，即刻检测完后剩余样品后放入４℃冰箱保存（所有样品均加盖），分别于２４ｈ、７ｄ再取出检测。
       取一患者静脉血及末梢血样品各连续检测１１次计算其精密度。
       以ｈｓ-ＣＲＰ参考区间（≤５．０ｍｇ／Ｌ）为依据将患者分为≤５．０ｍｇ／Ｌ及＞５．０ｍｇ／Ｌ２组。

四、统计学方法

       使用ＳＰＳＳ１３．０统计软件进行统计分析。ｈｓ-ＣＲＰ呈偏态分布，采用中位数（范围）表示。静脉抗凝血即刻检测值与其余检测值的差异性分析采用ｗｉｌｃｏｘｏｎ秩和检验，相关性分析采用Ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析。Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。

结　果

       一、静脉抗凝血样品精密度为２．３３％；末梢血样品精密度为２．３０％。

       二、静脉抗凝血样品ｈｓ-ＣＲＰ即刻检测值与末梢血即刻检测值比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），其他各时间段检测值与静脉抗凝血即刻检测值比较差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表１。

       三、以静脉抗凝血样品ｈｓ-ＣＲＰ即刻检测值为参比，末梢血样品即刻检测值与其比较偏差最小（Ｐ＞０．０５），相关性最好；而４℃放置２４ｈ后静脉抗凝血及末梢血样品相对偏差均增大，放置７ｄ时偏差明显增大（Ｐ＜０．０５），相关性均明显下降。

       四、样品放置４℃ ２４ｈ后有６９％的静脉抗凝血样品、６８％的末梢血样品测定值开始下降；放置７ｄ时测定值下降的样品数分别为７２％和７５％，与即刻测定值比较偏移最大可达４４％。但也有部分样品放置２４ｈ或７ｄ后测得的ｈｓ?ＣＲＰ值高于即刻测定值，最高的１例静脉抗凝血样品存放７ｄ后增高８１％。

讨　论

       目前常用于测定ＣＲＰ的方法有酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、散射比浊法和透射比浊法。本研究采用ＰＯＣＴ设备检测ｈｓ?ＣＲＰ，结果显示静脉抗凝血与末梢血样品的精密度无明显差异。表１、表２显示采血后即刻检测两者的相对偏差小，相关性好，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。临床检验中可根据实际情况选用其中一种样品进行检测。而实际工作中无论采用静脉抗凝血或手指末梢血，在血液的预处理阶段均需手工加样，因此应尽量避免人为因素造成的误差，如微量毛细血管吸样要准确；手指末梢采血时避免用力挤压，血液自然流出后拭去第一滴血再采样；静脉抗凝血进行预处理时应将血液充分混匀后吸样，并且血液预处理时应待血液完全溶血后再检测，若溶血不完全会出现与乳糜血相同的情况，即仪器显示空白过高无法检测。
       完整的ＣＲＰ是一种环形结构的五聚体，这种特征性的结构使其归类于五聚素家族，循环中ＣＲＰ半衰期为１９ｈ。本研究将末梢血样品和静脉抗凝血样品分别放置４℃保存，于２４ｈ、７ｄ取出检测的值与静脉抗凝血即刻检测的ｈｓ-ＣＲＰ值比较差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），且相对偏差增大。２种样品放置４℃ ２４ｈ后多数样品ｈｓ-ＣＲＰ值开始下降，放置至７ｄ时偏移最大可达４４％，但也有部分样品放置２４ｈ或７ｄ后测得的ｈｓ-ＣＲＰ值高于即刻值，最高１例静脉抗凝血样品存放７ｄ后增高８１％。众所周知，散射比浊法是检测可溶性抗原抗体复合物在液相中形成的浊度从而测定抗原的含量。脂血、类风湿因子和人抗鼠ＩｇＧ抗体都会使结果假性升高。而当样品放置时间延长后检测值大幅增高其原因有待进一步探讨。
       ＣＲＰ是一种急性期蛋白，常用于器质性疾病的筛查和并发感染的鉴别等，因此在临床中常作为急诊项目开展。ｈｓ-ＣＲＰ测定方法简便，个体日间和生理变异较小，是心血管事件一个较好的预测指标。美国已将ｈｓ-ＣＲＰ检测作为每年健康体检的内容之一。本研究显示在日常ｈｓ-ＣＲＰ检测中，即使作为体检样品，无论静脉抗凝血或经预处理过的末梢血都应即刻检测，若放置４℃冰箱也应在２４ｈ内检测完成。
       本研究因为手工加样操作，在诸多环节中有可能存在人为误差，且样品量不够大，故以上结论有待进一步论证。