Qubit荧光计-核酸浓度检测和蛋白定量仪

HaHa

核酸浓度检测和蛋白定量仪
Qubit 荧光仪能快速而准确地解答我们经常听到的问题：“我是否为检测收集到足够的 DNA（或 RNA 或蛋白质）？”这些分析物的定量对于下一代测序 (NGS)、 PCR 、转染、免疫印迹、免疫检测等下游应用来说非常重要。
Qubit 荧光仪检测可检出与靶分子特异性结合的荧光染料。优化后的 Qubit 检测支持区分 dsDNA 和 ssDNA 或区分完整和降解的 RNA，即使样本量极少或存在污染物。简单、直观的界面和内置计算器简化了流程。结果可在几秒钟内显示，并可导出到计算机或下游设备。
灵敏的特异性核酸和蛋白质定量检测
Invitrogen Qubit 检测使用靶标选择性染料，只有与 DNA 、 RNA 或蛋白质靶结合时才会发射荧光。它们比传统的紫外吸光法更准确。传统的紫外吸光法会因盐、溶剂、洗涤剂、蛋白至以及游离核苷酸等污染物的影响而过高估计样品浓度。荧光测量法也比紫外吸光法的灵敏度高很多，而 Qubit 荧光仪能够在显著降低的噪音下准确测量稀释的样品。
快速、准确、灵敏、特异性地定量 DNA、RNA 和蛋白质
Qubit 荧光仪能快速而准确地解答我们经常听到的问题：“我是否为检测收集到足够的 DNA（或 RNA 或蛋白质）？”这些分析物的定量对于下一代测序 (NGS)、 PCR 、转染、免疫印迹、免疫检测等下游应用来说非常重要。
Qubit 荧光仪检测可检出与靶分子特异性结合的荧光染料。优化后的 Qubit 检测支持区分 dsDNA 和 ssDNA 或区分完整和降解的 RNA，即使样本量极少或存在污染物。简单、直观的界面和内置计算器简化了流程。结果可在几秒钟内显示，并可导出到计算机或下游设备。
Qubit定量技术对目标分子有高度的选择性，比如：Qubit检测双链DNA浓度时，特异性检测待测样本中的的双链DNA，对于样本中存在的单链DNA或者RNA不检测。
这种特异性可以获得十分精确的结果，对于芯片分析（Microarray）和实时定量PCR（qPCR）而言，精确测定样本中的DNA或RNA是必需的。同时在新一代测序（NGS）实验中，对我们后续的精确建库过程也是很必要的。



Qubit 荧光法和紫外吸收法的样品浓度范围

使用 Qubit 系统进行荧光定量的灵敏度极高，可以对低丰度样品进行定量，并且只会测量目标靶，即使样品中同时包含 DNA 和 RNA。标准的紫外吸光法不足以检测低浓度的分析物，并且不能区分 RNA 与 DNA，而是会定量样品中的所有核酸。
此外，使用 Qubit 系统的荧光定量可以区分同一样品中的 RNA 和 DNA ，而紫外吸收度法则通常无法做到。Qubit 平台提供的全面解决方案对检测、耗材和仪器进行联合优化，从而实现了最佳性能，让您对结果的可靠性充满信心。
dsDNA 定量检测
相对于 RNA 和 ssDNA，我们的 Qubit dsDNA 高灵敏度 (HS) 和宽范围 (BR) 检测对 dsDNA 具有高度选择性。高灵敏度分析专为低浓度 dsDNA 样品而设计，有助于节省珍贵样品。dsDNA HS 和 BR 检测可很好的兼容盐、游离核苷酸、RNA、溶剂、洗涤剂或蛋白质等常见污染物。
ssDNA 定量检测
Qubit ssDNA 检测试剂盒设计用于定量长 ssDNA 或寡核苷酸。因其也可检测 dsDNA 和 RNA，请在检测前提纯 ssDNA。 但是，检测结果不受常见污染物的影响，如盐、短寡核苷酸（≤6 个碱基）、游离核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质。
RNA 定量检测
有三种 Qubit RNA 检测可用于定量不同浓度范围的大 RNA，且有一种检测可用于定量小 RNA 分子 (microRNA)。
RNA 定量检测
定量 RNA 时，您可以在初始样品浓度范围重叠的三种 Qubit RNA 检测试剂盒中进行选择，即 250 pg/μL - 10,000 ng/μL。相对于双链 DNA (dsDNA)，这些试剂盒对于 RNA 具有高度选择性。与其他 RNA 检测不同，该检测不需要 DNA 酶也可准确测量，即使样品中存在 DNA。这些检测可完美兼容盐、游离核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质等常见污染物。
microRNA 定量检测
Invitrogen Qubit microRNA 检测试剂盒设计用于对 microRNA 等小 RNA（17–25 nt 或 bp）轻松、精确地定量，即使存在盐、游离核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质等常规污染物等也可完成测定。相对于 rRNA或较大的信使 RNA (mRNA ) (>1,000 bp)，该检测对于 小RNA 具有高度选择性。

提纯样品中的小 RNA 可在检测管中低至 0.5 ng 的水平下可重复定量。该检测可检测所有类型的小 RNA 、包括 microRNA 和短干扰 RNA (siRNA)，且单链和双链均可。因其不检测核苷酸，所以也可区分小 mRNA 颗粒与完全降解的 RNA 。
RNA 完整性及质量 (IQ) 检测
Qubit RNA IQ 检测的开发是为了快速评价 RNA 样本的完整性和质量 (IQ)。它使用两种染料：一种结合较大的完整和/或结构化 RNA，而另一种结合较小的降解 RNA。此检测无需特殊处理、繁琐的样本制备或等待结果。
蛋白质定量检测
Qubit 蛋白质检测试剂盒让蛋白质的定量更加轻松、准确。这两种试剂盒拥有重叠的浓度范围，可在 12.5μg/mL 到 20 mg/mL 的初始样品浓度内保持准确，且结果对不同的蛋白质来说变异较小。Qubit 蛋白质检测易于操作，仅需 10-15 分钟的室温培养，无需长时间培养或暴露于高温下。
Qubit 荧光定量技术

Qubit 荧光仪检测 Qubit 检测中与样本中靶分子高度特异性结合的荧光染料。这些染料只有与靶结合时才会发射荧光信号、即使靶分子浓度很低，因此读数也非常灵敏。染料可在数分钟内吸收，并可由 Qubit 荧光仪在数秒内读取，然后将读数内插到标准曲线上。



可选择性结合 DNA、RNA 或蛋白的荧光染料。

Qubit 荧光仪采用专业的曲线拟合算法，使用浓度已知的标样绘制校准曲线。对于 DNA 、 RNA 或蛋白质浓度未知的样本，可通过比较样本与标样的相对荧光单位 (RFU) 而计算浓度。这些测量的检测限特定于每次检测。
Qubit 荧光检测技术具有极高的灵敏度，最少仅需 1 µL 样品，即使样品稀释倍数很高。因此其非常适合定量珍贵的样品。
准确、特异和灵敏
Qubit 4 和 Qubit Flex 荧光仪都可以快速、精确地定量其可检出特异性分子，即使是数量极少。例如、 Qubit 提供 DNA 检测以检测双链或单链 DNA 分子（dsDNA 或 ssDNA）。这些检测对其 DNA 类型来说具有高度选择性，即使存在 RNA、其他类型的 DNA 或常见污染物，包括盐、自由核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质。
DNA 定量
此检测中，Qubit dsDNA Hs（高灵敏度）检测具有 0.2–100 ng 的线性检出范围，且对双链 DNA (dsDNA) 具有选择性，即使存在等量的 RNA。



Qubit dsDNA HS 检测的灵敏度和选择性

Qubit dsDNA HS 检测可为已知递增数量的 dsDNA （绿色圆圈）保管准确、线性的结果，即使是在较低含量下（插图，放大了比例尺的最低端）。这些特异于 DNA 的测量仅受单独（红色三角形）或与 DNA 共同（蓝色方块）添加的 RNA 的影响。
1.Qubit检测能否指示核酸样品中的样品质量？
不能，Qubit 检测仅样品中DNA/RNA的量。Qubit荧光计不能获取吸光度读数以提供A260 / A280比率或检测核酸样品中的蛋白质。质量情况可以使用NanoDrop仪器完成。
2. 产品成分只有两个标准品，制作标准曲线的时候需要对standard 2进行稀释吗？
使用产品时可直接用两个标准品测定荧光值后做标准曲线，即两点连成直线。
如果想稀释多个梯度制作标准曲线，也可以使用1×TE对standard 2 进行梯度稀释。
另如果担心96孔板测试时候荧光相互干扰，可选择黑色的底部透明板。
3.使用酶标仪做Qubit检测，Ex值480 nm，Em值520 nm，但是我用的仪器没有这两个波长设置，其他的波长测定可以吗？准确度和灵敏度与酶标仪相比如何？
可以，picogreen的吸收峰如下图，可知Ex在480nm处有最大吸收峰，Em在520nm处有最大吸收峰，而如果仪器波长不在这两个上面，也是可以测定的，只不过荧光值会低一点的。


Qubit定量分析的准确度和灵敏度与酶标仪的准确度和灵敏度相同。这是产品开发过程中的一项要求。
4.为什么要做复孔？
Qubit是一个灵敏度比较高的浓度测定仪器，测量值与样本的质量和外界的温度都有关系，增加复孔可以有效降低测量过程中带来的误差，保证数据的可准确性。
5. 复孔对应的数据不一致？
1）操作误差；
2）样本质量差，浓度低对应的误差较大；
3）片段长度不均一（Qubit里面的染料对于不同长度的DNA结合能力有差别，重复对应的时间不同，荧光值不同）
6. 环境温度不同，测试的值会不同吗？
会的，Qubit里面对应的荧光染料在不同的温度下对应的荧光信号强弱会有偏差的，一般在低温测出的值会偏大大，高温测出的值偏小（在试剂盒中标准品恢复室温测试时，整体误差范围在10%左右，极限误差在15%左右）
7. 测试复孔的时候，连续测，不取出来，为什么值越来越小？
连续在激发光激发的情况下，荧光染料的半衰期会降低，此时对应收集的荧光信号会降低，对应的数据会偏低，建议读取完数据之后，从仪器中取出，5min左右再去测量，基本不会有什么偏差。
8. 如何检测Qubit试剂的测试准确性？
1）相对准确，参考life对应试剂测量，对比结果分析；
2）绝对准确，试剂盒中配套的标准品，经过适当稀释之后，上机测试，对比结果分析。

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