Western Blot内参不齐、非特异条带、背景黑、条带泛白...这么多问题，该怎么解决？一文教你跑出完理想WB结果！

Rose

但凡涉及生物医学领域研究，通过Western Blot检测蛋白水平是基本操作，其结果直接影响到课题结论和文章质量。然而，做WB实验的小伙伴，特别是新手小白，不可避免会遇到一些奇怪结果（如上图右）。比如已经做了蛋白定量，内参条带还是不齐，内参出现异常双条带，或者曝光背景很黑，条带泛白，marker显示条带等等问题，这些情况该怎么解决？大师兄为大家整理了一份WB问题解决对策，助你跑出完美WB结果。
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下面我们结合图片展示WB结果中的最常见10类问题给出分析及处理对策：
1.背景高（条带整体很黑）
左侧是高背景结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因及处理对策如下：


<hr/>2.信号低或无信号（无条带）
左侧是低信号结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因及处理对策如下：


<hr/>3.非特异条带（有杂带）
左侧是非特异结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因及处理对策如下：


<hr/>4.条带位置错误（条带不在预期分子量位置）


原因：在目标位置上方存在多个条带，说明蛋白形成了多聚体，或存在蛋白修饰。
处理对策：增加蛋白变性时间。


原因：在目标位置下方存在多个条带，说明蛋白降解。
处理对策：收样时加入蛋白酶抑制剂，避免蛋白反复冻融超过三次。
<hr/>5.条带斑点样缺失（条带上有白斑）
左侧是条带斑点样缺失结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因：转膜过程中出现气泡处理对策：转膜时将气泡排除干净。
<hr/>6.条带不完整（条带中间凹陷，两边高）左侧是条带不完整结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因：曝光时发光液在膜上不均匀
处理对策：将条带浸没在发光液中曝光。
<hr/>7.微笑样条带（条带弯曲）
左侧是微笑样条带结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因：电泳过程蛋白迁移太快，过热
处理对策：降低电压并在低温条件电泳。
<hr/>8.条带发白
左侧是条带发白结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因：蛋白上样量过大或HRP过多；处理对策：减少蛋白上样量，或增大二抗稀释比例。
<hr/>9.非特异黑色杂斑
左侧是非特异黑色杂斑结果图、右侧是改善条件之后的结果图


原因及处理对策如下：


<hr/>10.Marker曝光显示黑色条带
蛋白marker也曝光出来黑色条带


原因：抗体与蛋白marker特异性反应处理对策：在marker和相邻样本泳道之间加一个空白孔。
对于更多WB结果中非常见问题处理，我们给大家准备了一份整理好的WB实验结果中可能遇到的101种问题及其处理对策PDF文件，需要的小伙伴可以关注BioAdvance，回复WB，免费获取~
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