ELISA通关必备（11）丨数据分析篇

莺歌燕舞

做完ELISA实验，测完吸光度，数据怎么处理？标准曲线不是直线怎么办？小科整理了ELISA数据处理相关知识，希望对您有帮助。
一、ELISA标准曲线分析步骤

• 标曲和样本孔的每个孔450nm的OD值减去630nm（或570nm）的OD值；
  
• 再将获得的标曲和样本孔数据分别减去空白孔Blank的OD值；
  
• 以标曲的浓度为横坐标，以上算出的OD值为纵坐标，拟合标曲（选择R2值大于0.99的比较好的拟合方式，必要时可以删除个别差异较大的标曲点进行拟合）；
  

4.计算样本值，将样本减去空白孔的OD值复制，选软件中的“粘贴”，得到的X值再乘以相应的稀释倍数就是最终的浓度值。




<hr/>二、 ELISA标准曲线拟合方程

• 直线回归：直线回归是最基本、简单的回归分析方法，将所有的测试点拟合为一条直线，其拟合函数方程式为：y=a+bx。一般实际实验中线性极好的情况下直线回归可以获得较为理想的R2值，如果直线拟合不理想，可以考虑三次曲线、logistic曲线（四参数）等。
  
• logistic曲线（四参数）拟合回归方程：竞争法和夹心法都可以用到。它要求X值不能小于0(因为指数是实数,故有此要求)。在很多情况下它都可以拟合ELISA的反应曲线,所以它也成了ELISA中应用最广的模型之一。
  

注：曲线拟合方法虽多，要根据不同类型ELISA本身的特点，选择最适合的曲线拟合模型，才能得到最合理的实验结果。一般情况下，需要综合考虑标准曲线的趋势走向以及R2值的大小以及样本落值情况。

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