核酸提取干货全知道，完美实验数据无烦恼！

奋斗的小鸟

核酸提取，说则简单，实则更简单。但即使是"入门级”的实验，在操作过程中难免也会出现各种各样的Bugs。高质量的核酸是下游PCR/qPCR、重组载体、cDNA文库构建等相关实验成败的关键。尤其是RNA提取，一顿操作猛如虎，定量结果想吃土.....耽误大家两分钟，看完这篇文章再干饭，小M让你少秃点。
著有“玄学”之称的分子生物学，师兄师姐说小M要做的都是“升级打怪入门级”的实验，然而，实验记录本上清晰地罗列着自己整理的堪称完美的(假装看懂的Steps)实验流程,可是完美的流程下，总是充斥着不丝滑的操作--
提 DNA，PCR，电泳，纯化回收，构载体；提 RNA，反转录，文库构建，qPCR……如何快速完成一套绝美的逆袭！！！
完美操作第一步
打好科研“地基”从核酸提取开始
核酸是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础，是分子生物学研究的主要对象。如果要对核酸的结构和功能进行研究，首先就要对核酸进行提取和纯化。
核酸提取是个啥？字面意思，就是把核酸从样本中提取出来呗！
那一般常见的提取方法有哪些呢？



表 1.核酸提取的常见方法

提取步骤
核酸提取主要包括细胞裂解、核酸吸附、杂质漂洗和核酸洗脱四步。
那具体到实验中，我们该选择哪种提取方法呢？这就要看个人的实验设计方案及实验组的经费情况啦！
磁珠法提取效果当然很好，但贵是真的贵，而且还得购买配套的磁力架，批量提取的话，还是不太建议的！自配试剂的优缺点是显而易见的，若后续实验对核酸要求不高 (如常规的 DNA 提取，后续用做普通 PCR 扩增)，这种提取方法也可选择。
但如果对核酸的质量要求比较高 (如定量或文库构建等。尤其不能忽略的是 RNA 提取中的降解和纯度问题)，小 M 还是比较推荐受众度较高的离心柱法；至于质粒提取，考虑到纯度与浓度，肯定也选择这种性价比较高的离心柱法啦！



图 1. 离心柱法核酸提取流程图

来来来，排队队，顺带开启 Kits 介绍模式……
MCE 新推出三款核酸提取纯化试剂盒，均利用硅胶膜离心柱对核酸进行特异性吸附，改良的裂解液可以促进细胞充分裂解、蛋白变性、核酸释放；改良的吸附缓冲液能有效地促进核酸结合到硅胶膜上；最后经过洗脱即可获得高纯度核酸。
Kit one (基因组 DNA 小量抽提试剂盒)：我适用于从动物组织/细胞、酵母、大肠杆菌等样本中有效提取并纯化基因组 DNA，内含蛋白酶 K 可去除蛋白污染，经纯化的基因组 DNA 后续可用于 PCR、qPCR、酶切、Southern Blot 等实验。
Kit two (病毒 DNA/RNA 抽提试剂盒)：我适用于从血浆、血清、全血、组织匀浆液、痰液、动物细胞上清等中提取病毒 DNA/RNA。我不仅包含 蛋白酶 K，更有核酸助沉剂助力，提取的核酸那可不团团来嘛！纯化的病毒 DNA/RNA 可用于 PCR、RT-PCR、qPCR 等实验。
Kit three (质粒大量抽提试剂盒)：我适用于从 ≤500 mL LB 培养基培养的大肠杆菌细胞中高效的提取质粒 DNA。RNase A 可对 RNA 进行清除，柱上去除内毒素，Very good!
MCE 新上线核酸提取试剂盒 (离心柱型)
产品名称
Genomic DNA Mini Purification Kit
Viral DNA/RNA Mini Purification Kit
Plasmid DNA Maxi Purification Kit
完美操作第二步
避开操作“雷区”，拿到高纯度核酸
小M：Protocol 很完美，实际操作过程中，也难免会遇到各种小问题。
下面小 M 对 RNA 提取过程中常见问题进行了一一盘点。
(此处主要针对 RNA 提取，文末彩蛋有 DNA 和质粒提取注意事项汇总哦)。
RNA 提取后续试验主要包括 PCR、RT-PCR、qPCR、cDNA 文库构建等，RNA 没提好，后面的实验问题也是连贯性的，一个不小心可就都 game over 了。这个 RNA 提取，真的是……脑壳疼！
来来来，这道题，我们重点讲一下。
影响 RNA 得率低的因素很多？
抽提 RNA，当然要做到 “三从四德”。
一从：外源酶污染？NO！
二从：内源酶活性？NO！
三从：抽提目的性？YES！
一德：使用无 RNase 耗材，选择合适的操作环境。
二德：确定样本后选择合适的裂解液，样本与裂解程度不匹配，抽提结果也会大打折扣。
三德：裂解、匀浆、抽提、洗脱——快！准！狠！
四德：衡量抽提性价比的标准是后续实验的结果，得率不是唯一标准。即我们需要明确下一步的实验，如果是 PCR，其实验本身对 RNA 的质量要求没有那么高，而 qPCR 对 RNA 的要求相对又高点，但如果要做 cDNA 文库构建，其对 RNA 的要求就很高了，因此 RNA 质量便是 “经济基础” 了，颇有 “一损俱损” 的感觉了。
小白: “三从四德” 我也懂，但 RNA 得率这么低具体是为什么呢？
小M：还不是因为 RNA 太娇贵，放太久会降解，环境不干净会降解，吹口气也能降解~


彩蛋时间！！！
(含DNA和质粒提取注意事项）


相关产品
2× PCR Master Mix (with Dye)
高效、快速的 2× 浓度的即用型预混液（含溴酚蓝），含有常规 PCR 反应所需的所有组分（样品 DNA，引物和水除外）
2× Fast PCR Master Mix (with Dye)
用于快速 PCR 扩增的 2× 浓度的即用型预混液（含溴酚蓝），含有除样品 DNA、引物和水外的所有 PCR 成分。
2× High-Fidelity PCR Master Mix
新型高保真高效率的即用型 PCR 扩增预混液，适用于高难度长片段的 PCR 扩增实验。
RT Master Mix for qPCR II
采用升级款反转录酶，反应更高效、快速，适用于高 GC 含量、复杂二级结构、少量 RNA 模板等。即用型预混液，一步操作即可完成反转录反应，简便、快捷。
RT Master Mix for qPCR II (gDNA digester plus)
反转录即用型预混液，采用升级款反转录酶，反应更高效、快速，适用于高 GC 含量、复杂二级结构、少量 RNA 模板等。试剂盒配有 gDNA digester 可去除 RNA 模板中的基因组 DNA 污染。
SYBR Green qPCR Master Mix
2× 浓度的即用型预混液，含有 qPCR 的所有组分，只需加入样品 DNA，引物和水即可快速高效完成 qPCR 反应。
MCE SYBR Green qPCR Master Mix (Universal)
适用于所有 qPCR 仪的 2× 浓度即用型预混液。采用新型抗体法热启动 DNA 聚合酶，配合 PCR 反应促进因子及比例优化的 Buffer 体系，实现高特异性、高灵敏度的 qPCR 检测。
SYBR Green qPCR Master Mix (High/ Low/No ROX)
2× 浓度的即用型预混液，含有 qPCR 的所有组分， 只需加入样品 DNA，引物和水即可快速高效完成 qPCR 反应。

MCE浙江省总代理-杭州昊鑫生物
MCE相关产品可咨询昊鑫生物

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/591248597