ELISA的概念原理是什么？

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ELISA的概念原理是什么？
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同花顺

酶联免疫分析的原理主要包括三个关键步骤：固相免疫吸附、酶标记和底物显色。
首先是固相免疫吸附步骤。通常采用微孔板作为固相载体，将特异性的抗体或抗原吸附于孔板表面。这些抗体或抗原能够与待测物发生特异性结合，形成固相复合物。通过对待测物的抗原或抗体的选择，可以实现对不同分子的检测。
接下来是酶标记步骤。酶标记是指将酶与抗体或抗原进行共价结合，形成酶标记的复合物。常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。酶标记的选择需要考虑酶的稳定性、催化效率和信号检测的灵敏度等因素。
最后是底物显色步骤。在酶标记的复合物形成后，加入适当的底物，使酶催化底物发生显色反应。常用的底物有TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）、ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)）等。底物的选择需要考虑底物的催化效率、显色产物的稳定性和信号的强度等因素。
酶联免疫分析法的优点在于其高灵敏度和特异性。通过合理选择抗体或抗原，可以实现对待测物的高度特异性识别。而酶的催化作用可以将待测物的少量信号放大为可测量的信号，从而提高了检测的灵敏度。此外，酶联免疫分析法还具有操作简便、结果可视化和高通量等特点，使其成为许多生物分析实验室的常用技术。
然而，酶联免疫分析法也存在一些限制和注意事项。首先，酶标记的选择需要考虑酶的稳定性和催化效率等因素，不同酶的性能可能有所差异。其次，底物的选择需要考虑底物的催化效率和显色产物的稳定性等因素，不同底物的性能也可能有所差异。此外，酶联免疫分析法对样品的处理和操作步骤较为繁琐，需要严格控制实验条件，以确保结果的准确性和可重复性。
酶联免疫分析法是一种重要的生物化学分析技术，其原理基于酶和抗体或抗原的特异性结合，通过酶的催化作用产生可测量的信号，实现对待测物的定量分析。该方法具有高灵敏度、特异性和可视化等优点，广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物研发等领域。然而，在应用酶联免疫分析法时需要注意选择合适的酶标记和底物，严格控制实验条件，以确保结果的准确性和可重复性。

长长的路

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
进行检测时，样品中的受检物质（抗原或抗体）与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。
由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的灵敏度。
1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay, ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

清风寡欲

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。
此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。
即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。