DNA凝胶回收试剂盒试剂配方

生物科研实验室

从凝胶中纯化DNA是DNA片段亚克隆过程中的关键步骤。多年以来已经发表了许多从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA的方法。
目前市场上最主流的试剂盒操作的核心步骤是将DNA结合到硅胶膜表面。含有DNA条带的琼脂糖凝胶块溶解在离散缓冲液(chaotropic buffer）中，这破坏了琼脂糖聚合物之间的氢键。解离的 DNA滞留在硅胶珠或膜上，经水溶液或含有低浓度盐或乙醇的缓冲液回收。
那么这些试剂盒的配方是如何呢？
溶胶液异硫氰酸胍     3M乙酸钾            0.375MPH                  5.0
漂洗液乙酸钾                           50mMNa2EDTA·2H2O            83.5uMPH                                5.0乙醇                              80%（用时再加）
基础液：用800ml ddH2O溶解4.907g乙酸钾，加入167ul 0.5M Na2EDTA·2H2O（PH8.0）溶液，用冰醋酸调节到PH5.0，加水至1L。过滤除菌。
取200ml基础液，加入800ml乙醇。
洗脱缓冲液TE1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制：称取Tris碱6.06 g，加超纯水40 ml溶解，滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0，定容至50 ml。
0.5 M EDTA（pH 8.0）50 ml的配制：称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g，加超纯水35 ml，剧烈搅拌，用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0，定容至50 ml。（EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时，才会溶解。）