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[分享] ELISA 的原理,本质是什么,归纳成简单的话来说是什么?

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发表于 2024-9-9 11:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2024-9-9 11:42 | 显示全部楼层
【ELISA 竞争法视频】Biorbyt 科研小助手给大家讲讲ELISA竞争法,内含详细的实验原理动画解析,不可错过,值得收藏!
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发表于 2024-9-9 11:43 | 显示全部楼层
ELISA通常在多孔微孔板中进行,属于分子生物学测定法,常用于多肽、蛋白和抗体等各种分子的检测和定量。这种测定方法可检测pg/mL水平的目标分子,同时在基础研究和疾病研究中发挥着重要的作用。如果感兴趣可以到默克www.sigmaaldrich.cn看具体内容。

ELISA检测法:抗原-抗体相互作用
ELISA的基本分子成分通常包括酶偶联抗体、固定的目标分子和检测底物。ELISA获取数据的成功率和质量取决于抗体-抗原相互作用的亲和性和特异性,受多种因素影响,包括pH、温度和离子强度等。

ELISA检测法
直接法ELISA先使用直接结合酶标板或间接结合捕获抗体的固定抗原,再使用抗原特异性酶联一抗和检测底物。更常用的间接检测法先使用未偶联一抗,再使用特异性检测一抗的酶联二抗。间接法只有二抗与酶偶联,因而对目标抗原的免疫反应性更强。直接和间接检测法之外,捕获或“夹心”检测法先使用额外的抗原捕获抗体结合微孔板表面,然后类似上述间接法使用一抗和酶联二抗。

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发表于 2024-9-9 11:44 | 显示全部楼层
简单的说,原理是抗原抗体结合还有级联放大。本质是蛋白质定量检测。简单的形容就是把样本里的微量特定蛋白当成一个信号,把这个信号放大,便于检测。
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发表于 2024-9-9 11:44 | 显示全部楼层
一抗抓住抗原,自带酶的二抗抓住一抗,酶使底物反应发光。通过测光来表示抗原的多少。当然这只是最常用的间接法。
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发表于 2024-9-9 11:44 | 显示全部楼层
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。(转自丁香园)
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