ELISA样本如何处理、收集、保存？有没有建议？

虎威将军

ELISA样本如何处理、收集、保存？有没有建议？
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同花顺

一、实验的数据来源于哪里？


科研项目成功的关键是什么？合理的实验设计？严谨的实验操作？等这些都是必不可少的因素之一。但是，还有一项目是容易被忽视-样本，所有的实验的数据都来源实验样本，如果想要得到一个好的实验结果，就必须严格的把控实验样本的采集和预处理，保存。




二、常规样本的采集与保存有哪些诀窍？


常规组学样本的采集与保存避坑攻略，总结归纳为以下“七要素”，轻轻松松就能完成样本的收集：


七要素：

一致：实验组与对照组取样一致性，如组织样本组织块的大小、取样部位，血液样本性别年龄的匹配，尿液样本取样时间等；

除杂：去除与实验无关的杂质，如动物组织去血、植物组织去除泥土等污染物、菌体及细胞去除培养基等，推荐使用PBS缓冲液或者生理盐水，吸水纸吸干残留液体；

低温：样本预处理尽量低温，可以在冰上进行杂质去除和分装的操作，低温保存，通常保存在-80℃冰箱；

分装：根据实验用量进行分装，避免反复冻融；

迅速：样本收集，制备，存储和运输应尽可能的迅速，压缩样本采集到正式实验的时间；

标记：用优质的记号笔清晰的标记好样品名称，以免混淆样本；

包装：建议使用优质的离心管、冻存管收集样本，以防在运输和操作过程中样本管破裂以及聚合物对样本造成污染，植物样本可以用锡箔纸包装，锡箔纸外面套一个自封袋以免运输过程中样本洒落。
三、实验室常做的实验样本应该怎么处理？


今天我们来整理一下，一些常规实验样本保存方法及注意事项，包括：分子实验、蛋白实验、病理实验等。

蛋白实验（WB/ELISA）

1.组织样本：取新鲜组织，用无尘纸快速吸去血液，将组织剪成小块，放入装有液氮的锡箔纸中速冻后，放入液氮预冷的离心管中，液氮速冻5min后，-80度保存。

2.细胞样本：收集细胞悬浮液于1.5ml的离心管中，离心去上清，PBS洗涤三次，液氮速冻5min后，-80 ℃保存。
3.血清样本：收集全血，室温放置2h，4℃ 3000rpm/min 离心10min，吸取上部的血清即可，-80度保存。
4.运输条件：干冰运输
全血：新鲜抗凝血，避免剧烈震荡，避免凝血；立即提取。


分子实验（RNA/DNA）


（一）RNA提取（QPCR/测序等）


1.组织样本
组织取材在组织离体 30min 内完成，取样的动作要尽量快速利索，将组织切成任一方向小于 0.5 cm 的薄片（尽可能剪碎），抽取 1ml TRIzol 溶液于 2ml冻存管内，将样本完全浸没于TRIzol溶液(如0.4g样本需要约2.0 mL TRIzol的溶液)。液氮速冻后，-80 度保存。

注意：为完全有效的保护组织样本，该组织样本应完全浸没入 TRIzol 溶液中并且组织样本的任何一边的最大厚度不应超过 0.5 cm。

因为RNA容易降解如不能立即进行提取实验操作可使用储存在 RNAlocker中，细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。

2.细胞样本
细胞收集后用PBS缓冲液快速洗一次，每5×106个细胞加入1 ml TRIzol，用枪头反复抽打，直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；液氮速冻，-80 ℃保存。

3.血液样本
1) 加入1 ml TRIzol和 200-300μL新鲜血液（TRIzol：血液 = 3：1-5：1），用移液器吹打几次以帮助裂解样品中的细胞；
2) 样品剧烈震荡混匀1~2 min，直到絮状物全部溶解；
3) 室温孵育5 min以使核蛋白体完全分解；
4) 写好编号，封口膜封存，-80 ℃冻存。
注意：冰冻血液溶解过程中会有破碎的细胞释放RNA酶，因此建议在冰冻前加入TRIzol，切勿直接冻存新鲜血液，保存好的血液应避免反复冻融。

4.运输条件：干冰运输；

（二）DNA提取
1.组织样本
取材后，PBS清洗2-3次，液氮速冻， -80 ℃保存；
2.细胞样本
细胞收集沉淀后，液氮速冻， -80 ℃保存；
3.运输条件：冰袋运输；


病理实验


（一）石蜡切片

1.组织样本
取材后，PBS 清洗 2-3 次，使用 4%多聚甲醛固定，组织样本需完全浸泡在固定液中，固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于 10:1。室温保存。
注意：取材样本要新鲜，否则细胞内溶酶体会破裂，造成细胞自融。

2.细胞样本
细胞爬片后，4%多聚甲醛固定30min，换PBS浸没4度保存。

3.运输条件：常温运输;

4.其他组织保存、固定等




(二)冰冻切片

1.动物组织样本
① 1-3min内取样，取样组织2mmX2mm大小，尽量薄。如来不及修整组织大小可先于电镜固定液内固定半小时左右待组织变硬以后再修整组织进行后固定。超出此范围后组织会无法完全固定，后续实验无法完成，务必请重视此过程。

② 取材时尽量精确到需要观察的目的部位（如观察肾小球取肾皮质；观察胰岛取胰岛丰富的胰尾；皮肤，肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定）。

③ 取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。

④ 组织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。4℃时样本可保存1个月左右。

2.细胞样本
贴壁细胞：实验目的重点观察细胞连接，将培养好的细胞弃培养基不经漂洗迅速加电镜固定液用细胞刮沿一个方向轻轻刮下细胞收集到离心管内（避免刮破细胞）。实验目的重点观察细胞器，对细胞形态形状无特殊要求，用胰酶消化，离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小，弃固定液后加新的电镜固定液室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细胞：离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小，弃培养基后加电镜固定液室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。
四、不能立即实验的样品应该怎么长期保存？


相信很多对比组比较多的研究课题一次性会取很多样本，没有办法取材后立即进行试验，需要对大量的样品进行较长时间的保存，那么如何选择合适的保存条件呢？首先我们应该了解不同的储存温度对样品会有哪些方面的影响？

一、储存温度对样本的影响
生物样本的长期储存，通常使用尽可能低的温度来降低样本内的生化反应，以提高样本内各种成分的稳定性。生物大分子、细胞、组织和器官的常用储存温度为 -80℃（超低温冰箱）、-140℃（液氮气相或深冷冰箱）及 -196℃（液氮液相），温度越低样本的稳定保存时间越长。




不同温度对生物样本的影响和保护作用

1) -60~ 0℃ 储存
此温度是水的结晶温度，容易对细胞和组织的微观结构造成损害，一般不使用这一温度来保存组织和细胞。且在组织样本内生物大分子受到细胞组织内多种因素的影响，稳定性有可能明显降低，所以通常样本库不使用 -60~0℃ 作为储存温度。




2)-80℃ 储存
-80℃ 是较常用的样本保存温度，也是常用超低温冰箱所能达到的温度。基于操作简便性、储存量和成本等因素来考量，这一温度也是目前保存样本中生物大分子活性的常用温度。




但对不同的生物大分子活性来说，这一温度下到底能保持多久的问题仍然处于研究探索中。

组织中 DNA 的稳定性较好，可以在 -80℃ 下保持数年或更长时间。但 RNA 则容易被广泛分布于细胞和各种组织里的 RNA 酶降解。RNA 在稳定剂中的储存时间一般不超过 5 年。所以为长期保存 RNA 活性，建议使用更低的温度，或者利用小部分样本提取 RNA 与剩余样本同步储存。其他样本内的蛋白质和脂类等生物大分子在 -80℃ 下也能保存，但时间长短不一，稳定性逐渐衰减。

3）-196℃ 储存
-196℃ 是液氮挥发的温度，所以只有液氮液相保存技术能达到此温度。样本内的生理、生化活动在此温度下基本停止，稳定性状的样本可以得到长期保存。液氮保存是长期保存样本内细胞活性、组织器官的复杂结构及活性的最有效方法，已广为接受与认可。




与其他不同温度冷冻模式相比，液氮容器液相储存样本需要做好防护样本间的交叉污染。美国国家癌症研究所推荐螺旋盖并带有橡胶密封圈的冻存管封装样本。但在降温过程中样本从超低温冰箱（-80℃）转移到液氮中时骤然降温，引起冻存管管帽和管身收缩不一致，容易导致液氮渗入冻存管，从而增加样本间交叉污染的风险。解决的办法之一是可以使用专门的冻存管管套对每个冻存管进行热缩密封，或是使用密封膜在冻存管管帽与管身接口处缠2~3圈再储存。

液氮并不能做到真正无菌，它不能消毒，只能降低细菌、病毒的活性，这种潜在的生物危害会使浸泡在液氮中的样本被污染。因此研究者又发明了一种新的液氮方法——气相液氮罐，将样本置于液氮蒸气中。虽然用气相液氮罐存储样本也不是完全没有风险，致病菌、真菌还是有可能生长，但是因为没有液体介质的存在，从而避免了交叉污染。
五、常见样本储存温度怎么选择？


选择储存温度应考虑样本的类型、预期储存的时间、样本中生物分子的特性、不同细胞的特性。

细菌和细胞的活性临界温度通常认为是 -140℃，在这个温度下，所有的代谢活动都停止，对于能承受在此温度下保存的样本，建议选择低于这个温度进行储存，利于长期稳定的储存。一些样本不能承受这么低的温度，它们的储存温度一般选择 -80℃，在此温度下，代谢活动并没有完全停止。另外，一些经过特殊处理的样本，则可在低温和室温条件下储存。

1）固体组织样本的储存温度：
长期储存的新鲜冰冻组织和 OCT 包埋冰冻组织应储存于液氮中，冰冻组织切片或者用于 DNA 和 RNA 提取的冰冻组织应储存在 -80℃。经过福尔马林固定的石蜡包埋组织及组织切片应储存在室温，在低于 27℃ 的环境下，并控制虫患和湿度。

2）液体样本的储存温度：
对于液体样本，包括血液和尿液，样本里的各种成分应在储存前分离，使得每一种成分能够在最佳条件下储存。全血、血清、血凝块、非淋巴细胞和血浆样本应储存在 -80℃。血沉棕黄层和白细胞应储存在液氮中。尿液应储存在 -80℃ 或者液氮中。

3）细胞的储存温度：
长期保存的细胞系应储存在液氮中。气相液氮比液相液氮储存样本更好。虽然液相液氮的温度更低一些（-196℃），但气相液氮的温度（-150℃）仍在临界温度之下。对于需要但没有条件使用液氮保存的细胞样本，应至少储存 -80℃ 环境中。
六、样本的冻存和取用应该注意什么？


样本储存在稳定的条件下，应避免反复冻融。样本反复冻融会加快生物大分子物质的降解，严重影响样本的质量。样本在冻存前，最好分装成小份样本再储存，可以避免不必要的反复冻融，一般够一次研究用量即可。

当需要冻融样本时，应按照标准流程确保样本的稳定性和质量。样本在冻存过程中应采用合适的冷却速度，控制冰晶大小，以及冰晶形成速度，这些将影响到样本的质量。

样本使用时，需要采取必要的融化和复苏。储存的温度越低，复苏和融化所需的时间越长。当从冷冻状态中解冻时，最好的方式是 37℃ 水浴，过程不宜太长，避免损害样本的生物活性。

队长是我

ELISA作为免疫学中最经典的实验，能及时和经济地测定和量化样品中的抗原或抗体，被视为生物样品定量检测的金标准。为了获取最准确的实验结果，应尽可能消除其他类因素带来的误差和影响，因此需要参照各类不同样本的处理和保存办法进行实验前准备 。贝茵莱生物为大家准备了一份ELISA样本收集/保存/运输指南，助力您的科研实验更加精准、高效！
ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血清、血浆、尿液、粪便、细胞、动物组织、植物组织、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液等，这些样本的收集、处理的方法和保存都有一定的要求，如果处理不当，会直接影响到之后的正式试验。
样本的收集及处理方法
1、血清
干燥管（黄色）或促凝管（红色）收集全血，室温自然凝固10-20min，离心5-10min（2500-3500rpm）。采血过程中应避免溶血，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心；
2.血浆
抗凝管（紫色、黑色、绿色）收集全血，采集后马上混匀，静置10min左右，离心5-10min（2500-3500rpm）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心；
3.尿液
用无菌管收集，离心10-20min（2500-3500rpm），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心；
4.粪便
用无菌 15ml 离心管收集, 1g 样本+9ml PBS（0.01M，pH=7.4），充分匀浆完离心5-10min（2500-3500rpm/min），取上清备用；
5. 细胞
检 测 分 泌 性 的 成 份 ： 用 无 菌 管 收 集 ， 5-10min（2500-3500rpm），仔细收集上清；
细胞内指标：吸去培养板内的培养基，胰酶消化细胞，收集细胞沉淀，PBS（0.01M，PH=7.4）清洗一次，PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到 1×106个/ml 左右，充分研磨后超声裂解（用超声细胞破碎仪，300W功率，每次超声3～5秒，间隔30秒，重复4～5次），或反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份，离心5-10min（2500-3500rpm），取上清备用；
6.动物组织
用无菌 15ml 离心管收集, 组织重量不能低于 50mg，1g 组织加入 9ml PBS（0.01M，PH=7.4），手工或匀浆器将标本匀浆充分，匀浆过程中，PBS 分 2 次加进去，这样匀浆更充分。充分匀浆完离心 5-10min（2500-3500rpm/min）。取上清备用（切勿加入细胞裂解液）；
7.植物组织
用无菌15ml离心管收集, 组织重量不能低于 50mg，1g 组织加入 9ml PBS（0.01M，PH=7.4），手工或匀浆器将标本匀浆充分，匀浆过程中，PBS 分 2 次加进去，这样匀浆更充分。充分匀浆完离心 5-10min（2500-3500rpm）。取上清备用（切勿加入细胞裂解液）；
8.牛奶
8000rpm 高速离心，离心后分三层，第一层是脂肪层，中间层是乳清，底层是固态蛋白，取中间层保存备用 。乳清量参照血清量；
9.胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液
处理方法同尿液。
注意事项
1. 不能检测含NaN₃的样品，因NaN₃ 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性；
2. 收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性；
3. 在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物，室温混匀后使用；
4. 若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差；
5. 对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差。
样本的保存与运输

保存
样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。
运输
使用冰袋或干冰运输，确保运输到达里面的冰袋或干冰未融化，运输时间应尽量短。

—END—

卡卡

ELISA作为免疫学中最经典的实验，能及时和经济地测定和量化样品中的抗原或抗体，被视为生物样品定量检测的金标准。为了获取最准确的实验结果，应尽可能消除其他类因素带来的误差和影响，因此需要参照各类不同样本的处理和保存办法进行实验前准备 。本篇文章为大家准备了一份ELISA样本收集/保存/运输指南，让你的科研实验更加精准、高效！
ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血清、血浆、尿液、粪便、细胞、动物组织、植物组织、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液等，这些样本的收集、处理的方法和保存都有一定的要求，如果处理不当，会直接影响到之后的正式试验。
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如图所示操作即可领取

<hr/>一、样本的收集及处理方法

1、血清
干燥管（黄色）或促凝管（红色）收集全血，室温自然凝固10-20min，离心5-10min（2500-3500rpm）。采血过程中应避免溶血，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心；

注意事项：根据自身实验需要，取适量上清液可进行ELISA测定。 请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求，如有特殊要求，需按照说明书提示进行操作，建议使用EDTA。血浆中除含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成分均与血清相同。制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA，因为抗凝不完全的标本会因纤维蛋白原干扰实验而造成假阳性。

2.血浆
抗凝管（紫色、黑色、绿色）收集全血，采集后马上混匀，静置10min左右，离心5-10min（2500-3500rpm）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心；
3.尿液
用无菌管收集，离心10-20min（2500-3500rpm），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心；
4.粪便
用无菌 15ml 离心管收集, 1g 样本+9ml PBS（0.01M，pH=7.4），充分匀浆完离心5-10min（2500-3500rpm/min），取上清备用；
5. 细胞
检 测 分 泌 性 的 成 份 ： 用 无 菌 管 收 集 ， 5-10min（2500-3500rpm），仔细收集上清；
细胞内指标：吸去培养板内的培养基，胰酶消化细胞，收集细胞沉淀，PBS（0.01M，PH=7.4）清洗一次，PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到 1×106个/ml 左右，充分研磨后超声裂解（用超声细胞破碎仪，300W功率，每次超声3～5秒，间隔30秒，重复4～5次），或反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份，离心5-10min（2500-3500rpm），取上清备用；
6.动物组织
用无菌 15ml 离心管收集, 组织重量不能低于 50mg，1g 组织加入 9ml PBS（0.01M，PH=7.4），手工或匀浆器将标本匀浆充分，匀浆过程中，PBS 分 2 次加进去，这样匀浆更充分。充分匀浆完离心 5-10min（2500-3500rpm/min）。取上清备用（切勿加入细胞裂解液）；
7.植物组织
用无菌15ml离心管收集, 组织重量不能低于 50mg，1g 组织加入 9ml PBS（0.01M，PH=7.4），手工或匀浆器将标本匀浆充分，匀浆过程中，PBS 分 2 次加进去，这样匀浆更充分。充分匀浆完离心 5-10min（2500-3500rpm）。取上清备用（切勿加入细胞裂解液）；
8.牛奶
8000rpm 高速离心，离心后分三层，第一层是脂肪层，中间层是乳清，底层是固态蛋白，取中间层保存备用 。乳清量参照血清量；
9.胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液
处理方法同尿液。
<hr/>注意事项

1）不能检测含NaN₃的样品，因NaN₃ 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性；
2）收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性；
3）在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物，室温混匀后使用；
4）若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差；
5）对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差。
<hr/>二、样本的保存与运输

保存
样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。
运输
使用冰袋或干冰运输，确保运输到达里面的冰袋或干冰未融化，运输时间应尽量短。

长长的路

能够应用 ELISA 实验的样本种类很多，有血清，血浆，细胞上清，细胞裂解液，尿液，关节滑液，脑脊液，肺泡灌洗液，各种组织的组织匀浆；采集和处理的方式都不相同。
下面就列出各类样本的采集、处理和保存方式。方法大多出自文献和试剂盒说明书，部分方法经验证过，但有的方法并没有实际操作过，所以，以下方法仅供参考。

一、ELISA 实验中血清的采集、处理和保存；
1、真空采血针采集 2ml 新鲜血液，加入无菌试管中；
2、采血后室温静置 1 小时；
3、将采集血液用离心机 4℃，2500rpm 离心 10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、取上清。 分装冻存备用，
     2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
     -20℃下，可放置保存 1 个月；
     -70℃下，可放置保存 6 个月；
5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。
大部分 ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以 HRP 为标记的 ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性 HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜 时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，间接法 ELISA 中可使本底加深。

二、ELISA 实验中血浆的采集、处理和保存；
1、真空采血针采集 2ml 新鲜血液，加入无菌试管中；
2、按 1:9 加入抗凝剂（EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠），30 分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；
3、将采集血液用离心机 4℃，2500rpm 离心 5min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、取上清。 分装冻存备用，
      2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
     -20℃下，可放置保存 1 个月；
     -70℃下，可放置保存 6 个月；
5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。 请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求，建议使用 EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。
注意事项：制备血浆标本需借助于抗凝剂 EDTA,抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。

三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存；
1、采集尿液样本 500ul，加入无菌试管中；
2、将采集血液用离心机 4℃，2500rpm 离心 10min，，将离心好的样本留上清，弃下面沉淀。
3、取上清。 分装冻存备用，
      2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
      -20℃下，可放置保存 1 个月；
      -70℃下，可放置保存 6 个月；
4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存；
1、采集脑脊液样本，加入无菌试管中；
2、将采集血液用离心机 4℃，2500rpm 离心 10min，，将离心好的样本留上清，弃下面沉淀。
3、取上清。 分装冻存备用，
     2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
     -20℃下，可放置保存 1 个月；
     -70℃下，可放置保存 6 个月；
4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存；
1、采集细胞培养上清液 500ul，加入无菌试管中；
2、分装冻存备用，
      2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
      -20℃下，可放置保存 1 个月；
      -70℃下，可放置保存 6 个月；
3、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

六、ELISA 实验中细胞裂解液的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓度）
1、取细胞培养板或细胞悬液，用 PBS（PH7.2-7.4）洗涤细胞培养板 1-2 次。
2、通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂（裂解液），使细胞破坏并放出细胞内成份。
3、将采集血液用离心机 4℃，2500rpm 离心 20min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、取上清。 分装冻存备用，
      2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
      -20℃下，可放置保存 1 个月；
      -70℃下，可放置保存 6 个月；
5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

七、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存；
1、10%水合氯醛溶液，腹腔麻醉。
2、打开腹腔，另取 10ml 注射器行下腔静脉采血，尽可能将血放尽。
3、在冰面上对左肺进行肺灌洗。取 37℃生理盐水 5ml，分三次灌洗：2ml、1.5ml、1.5ml灌洗。回收率在 70%以上。
4、将肺泡灌洗液用离心机 4℃，1500rpm 离心 10min。
5、取上清。 分装冻存备用，
     2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
     -20℃下，可放置保存 1 个月；
     -70℃下，可放置保存 6 个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

八、ELISA 实验中关节滑液的采集、处理和保存；
1、口腔关节：患者取坐位，常规消毒后，作皮下及关节后区局部浸润麻醉。然后嘱患者大张口，采用装有 2ml 生理盐水的注射器（5 号针头）作关节上腔 穿刺，髁后进针，针尖方向斜向前、内、上，抵达关节结节后斜面后稍后退，回抽如发现有淡黄色液体，即表明已进入关节上腔，注入 2ml 生理盐水，反复注入、 回抽五次。
膝骨关节滑液：无菌穿刺取得关节液。
2、将关节液用离心机 4℃，1500rpm 离心 15min，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
3、取上清。 分装冻存备用，
     2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
     -20℃下，可放置保存 1 个月；
     -70℃下，可放置保存 6 个月；
4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

九、ELISA 实验中各类组织匀浆（容易匀浆的组织）的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓度）
1、 采集组织，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，剔除附属的结缔组织，称取组织块。
2、用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的 9 倍，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织 的小烧杯放入冰水中）。
3、匀浆的方式有多种：
a) 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的 1/3 匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8 分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
b) 机器匀浆：用组织捣碎机 10000～15000r/min 上下研磨制成 10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间 10 秒/次，间隙 30 秒，连续 3～5 次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
4、将制备好的 10％匀浆用离心机 4℃，3000rpm 离心 15min，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
5、取上清。 分装冻存备用，
      2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
      -20℃下，可放置保存 1 个月；
      -70℃下，可放置保存 6 个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

十、ELISA 实验中各类组织匀浆（不易匀浆的组织）的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓度）
1、采集组织，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，剔除附属的结缔组织，称取组织块。
2、用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的 9 倍，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织 的小烧杯放入冰水中）。
3、匀浆的方式有多种：
a)手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的 1/3 匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8 分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
b)机器匀浆：用组织捣碎机 10000～15000r/min 上下研磨制成 10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间 10 秒/次，间隙 30 秒，连续 3～5 次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
c) 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用 Soniprep150 型超声波发生器以振幅 14 微米超声处理 30 秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用 40 安培，5 秒/次，间隙 10 秒反复 3～5 次。
4、将制备好的 10％匀浆用离心机 4℃，3000rpm 离心 15min，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
5、取上清。 分装冻存备用，
      2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
      -20℃下，可放置保存 1 个月；
      -70℃下，可放置保存 6 个月；
6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

同花顺

1.细胞培养上清细胞培养液在2500rpm/min 离心20分钟后，收集上清即刻检测， 或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。
2．血清样本分离管分离血清。在 1000 g 离心之前，使血样凝集 30 分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。
3. 血浆样本EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。在血样收集 30分钟内离心收集样本。即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。
注意：不要使用严重溶血或高血脂的样本。
所有样本收集后，应及时分装并贮存于-20℃。如果在 24 小时内检测，样本可以存放在 2 - 8℃。避免样本的反复冻融。在分析前，冷冻样本应该缓慢的恢复至室温，轻柔地混匀。检测前，样本中可见的沉淀必须去除。