【组培专题2】关于培养基的几个问题

HaHa

组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点，适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时，应对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择使用。培养基中的激素种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料而有变化。



植物组培常见培养基都有哪些？‍

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MS 培养基：1962 年穆拉辛格和斯库格为烟草细胞培养而设计，其中硝酸盐的浓度高，适合植物原生质体、细胞和组织培养。

B5 培养基：1968 年甘伯尔格为大豆细胞培养而设计，铵的浓度低。适合木本植物的组织和细胞培养。


富盐平衡培养基：是目前使用最广泛的一类，特点是：无机盐浓度高，微量元素种类齐全，浓度高；元素间比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲能力、稳定性好、营养丰富，一般培养时无需再加入有机成分。

高硝态氮培养基：代表性培养基有 B5、N6、SH。特点是：硝酸钾浓度高，氨态氮浓度低，含有较高浓度的硫胺素（VB1）。


中盐培养基：大多是在 MS 培养基基础上进行改良设计。特点是：大量元素无机盐为 MS 的一半，微量元素种类减少、含量增高。维生素种类比 MS 增多，例如增加了生物素、叶酸等。


低盐培养基：无机盐、有机成分含量浓度低，多用作生根培养的培养基。


培养基配制注意事项

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植物组织培养最常用MS培养基，包含十几种化合物。有些化合物相遇会发生化学反应产生沉淀，影响培养基的营养成分，所以MS培养基需要配制多种高倍母液。
配制母液时，尤其涉及大量元素的母液时，一定要等一种成分溶解之后，再缓慢的添加另一种成分；切记一锅煮，即不能将各种化合物一齐添加进去。

灭菌后培养基不凝胶或者凝胶偏软

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植物凝胶、琼脂都对酸性条件敏感，pH值低于5很难成胶或凝胶偏软，切记高压灭菌前调节培养基pH值（5.5 - 6.0）。植物凝胶对二价阳离子浓度有要求，也就是相对于 MS 培养基，1 / 2 MS 培养基中植物凝胶要适当增加用量。
灭菌后，倒出培养基前一定将培养基摇匀（带防烫手套），因为琼脂密度大底层含量高，容易造成培养基强度不均匀。

酸水解和酶水解酪蛋白在使用过程中的区别？

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水解酪蛋白对胚状体、不定芽的分化有良好的促进作用，通常用量在 500 mg/L，不管是酸解还是酶解，作用都是一样的，酶解更有利于发挥其作用。

如何溶解组培常用植物激素？

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IAA、IBA、GA、玉米素、多效唑等应先溶解于少量 95% 的乙醇中，再加水定容配制成母液。
如有结晶析出，可考虑用 1 / 10 体积的乙醇溶解后再定容；2,4-D易溶于碱性水溶液，可用少量1mol/L的NaOH溶液溶解后再慢慢加水定容；KT和6-BA先用少量的HCl溶解，再加水定容到一定的浓度。

细胞分裂素使用浓度

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一般情况下在培养基中加入 0.1～10.0 mg/L 的细胞分裂素（6 -BA/KT/ZT)，多数用 1.0～2.0 mg/L，KT 浓度为 0.5～2 mg/L，浓度要根据实验材料来调整。细胞分裂素可以单独使用也可以与细胞生长素配合使用。

哪些植物激素能高压灭菌，哪些不能高压灭菌？

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IBA、NAA、6 -BA、2,4 -D 可高温高压灭菌。IAA、GA3、茉莉酸等不可高温高压灭菌，否则会分解失效，该类植物激素配制母液后需用 0.22 微孔滤膜过滤除菌，待培养基冷却（50 - 60℃）后尚未凝胶前加入混匀。

培养基的 pH 值会凝胶硬度的影响

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若将培养基 pH 值调的过高（大于 6），则培养基偏硬，增加接种的阻力，会对外植体造成损伤。
若将培养基 pH 值调的过低（小于 4.5），则培养基不能凝固，起不到固定外植体的作用。一般将培养基的 pH 调节至 5.5～6.0 为宜。

灭菌过程是否影响培养基的pH值？‍

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培养基中的蔗糖和激素在高温灭菌过程中容易酸化，培养基 pH 值灭菌后会有所下降，灭菌前培养基的 pH 值偏低可能导致培养基不凝或偏软。要求偏酸性的培养基可适当增加琼脂或植物凝胶的用量。

材料长期培养几乎无反应，怎么办？

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可能原因：培养基不适合，生长素的选择和用量不当，植物激素对生长发育和生理过程的调节作用，往往不是某一种植物激素的单独效果；环境温度不适宜。

改进措施：
更换培养基或调整培养基成分，尤其是调整盐离子浓度；
调整激素的种类与配比，增加生长素用量，例如使用人工合成的生长素类似物 2，4 -D 等可有效促进细胞分裂和伸长，新器官的分化和形成；
调整培养温度等环境条件。

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