什么是免疫组化？

空白派

什么是免疫组化，可能有些人听过有些人没有听过，下面我们可以一起了解一下什么是免疫组化。

免疫组化原理
免疫组织化学（IHC）也称免疫细胞化学，是利用免疫学方法，用已知的特异性抗体（或抗原）对组织细胞中相应的抗原（或抗体）进行检测，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显色剂（酶、金属离子等），显示出颜色，借助显微镜可观察到组织细胞内标记物显示出的特异性抗原-抗体结合物（阳性反应）。
应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
简单来说就是抗体与抗原相结合
免疫组化的意义
⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断
⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位
⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型
⑷确认组织类型和种类
⑸发现微小转移灶
⑹为临床提供治疗方案的选择
而我们常说的PD-L1检测是什么？与免疫组化之间有什么关系？



免疫检查点(Immμne Checkpoints)是指在免疫细胞上表达、能调节免疫激活程度的一系列分子,它们对防止自身免疫(免疫功能发生异常,对正常细胞发动攻击)作用的发生,起着重要作用。通俗的说，免疫细胞会产生调节自身免疫功能的蛋白小分子，这些小分子就是免检查点（识别自身与排除异己）。而PD-1和PD-L1是免疫检查点中的抑制信号。免疫检查点抑制剂（PD-1/PD-L1抗体等）阻断PD-1,PD-L1的结合，恢复免疫系统的功能。免疫检查点抑制剂正是通过抑制肿瘤细胞表达受体与免疫检查点结合，恢复免疫系统的正常工作，进而对肿瘤细胞发动进攻。





正常情况下哪些细胞会表达PD-L1？
1.免疫细胞：T细胞，B细胞，髓系细胞，树突状细胞，活化后表达上调；
2.非血液细胞及微血管内皮细胞；
3.炎症环境中的实质细胞。

那么，有多少肿瘤会表达PD-L1呢？
1.包括：NSCLC，RCC，黑色素瘤，胃癌，乳腺癌及其他肿瘤，多种肿瘤表达PD-L1；
2.但是不同肿瘤或组织学类型表达PD-L1表达不同；
3.PD-L1的表达在肿瘤中可能随着治疗而改变

PD-L1检测的意义
PD-L1高表达：对免疫疗法更加敏感，免疫药物治疗效果更好；
PD-L1低表达或不表达：对免疫疗法不敏感，免疫药物治疗可能无效。

实验流程（人工）
1.脱蜡和水化：
脱蜡前应先放置在烤片机或烘箱内62℃烤片1个小时，如果前处理无法保证的临床样本，防止样本脱片，可适当升高烤片温度，如70度1个小时或75度半小时。为了脱蜡脱干净可把切片放置在切片架上竖放进行烤片。
。烤完片子放入脱蜡液或者二甲苯中进行脱蜡，两次各10min
。100%的无水乙醇中泡两次各5min
。95%乙醇5min
。90%乙醇5min
。80%的乙醇5min
。70%乙醇5min
进行梯度水化，梯度可修改
注意脱蜡要干净，脱蜡不干净会造成假阴性染色不均匀的结果
注意水化后在实验中要防止干片，加试剂需在湿盒中进行孵育。

2.抗原修复
修复方法不同可根据条件选择合适的修复方法进行修复
。高压修复   把抗原修复液倒进高压锅中先加热煮沸，然后放入切片进行高压，高压结束，把高压锅放置在水流下降温放气。打开盖子自然冷却至少半小时。注意整个修复过程要保证修复液足够，修复过程切片始终浸没在修复液中
。微波修复法
。煮沸修复法
先把抗原修复液倒入锅中，先进行煮沸，然后放入切片，关盖不关严，注意修复时间，防止爆沸造成脱片，修复完成打开盖子，室温冷却至少半小时。

3.淬灭
。进行清洗，然后加入3%的过氧化氢，消除内源性过氧化物酶的活性。
。然后进行清洗，画阻断线，注意画完阻断线后清洗需要使用清洗试剂清洗。如PBST或TBST

4.封闭
。加入封闭试剂进行封闭，减少非特异性染色，注意封闭试剂是与二抗同来源性血清。
。PBST洗3次

5.一抗孵育
。加入一抗工作液进行孵育，
。PBST洗3次
。加入一抗增强剂
。PBST洗3次

6.二抗孵育
。加入二抗进行孵育
。PBST洗3次
7.显色
。加入配置的DAB显色液进行染色，这个过程可观察染色情况
注意不要染色过头。


。清洗

8.苏木素染色泛蓝
。加入苏木素进行染色，
。使用清水或纯水泛蓝
如果染色过浅可重复染色，如果染色过深可使用盐酸进行分化。



9.脱水封片
。70%乙醇2min，80%乙醇2min，90%乙醇2min，95%乙醇2min，100%乙醇两次各2min，最后放入二甲苯或透明液中脱水，前面脱蜡如果是使用的脱蜡液后面脱水相对应的使用透明液
。最后进行封片，使用中性树胶进行封片，滴加一滴树胶在组织旁盖上玻片，注意小心不要有气泡，树胶适量，如果树胶滴多了可使用二甲苯小心擦拭多余的树胶
。风干几分钟

10.扫描结果
封片结束后观察结果（电子显微镜，扫描仪






相关阅读
单细胞多组学专题：人肺空间分辨图谱表征腺体相关的免疫生态位

靶向FTO可抑制肿瘤干细胞的维持和免疫逃避

Nature 重磅｜MGH 团队采用类器官模型与血浆蛋白质组学发现克服免疫逃逸新靶点TBK1

靶向FTO可抑制肿瘤干细胞的维持和免疫逃避

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/646204997