流式细胞仪检测应用介绍（二）-免疫细胞亚群分型

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• 实验原理
  不同T细胞亚群表面抗原不同，通过加入不同的抗体可以区分T细胞亚群，且可以计算其所占比例。通过绝对计数微球可以准确计算各亚群的细胞数，与标准范围比较可以得出免疫力综合评分。
  
• 样本形式：人、小鼠、大鼠新鲜EDTA抗凝全血；人、小鼠、大鼠新鲜组织制备成的单细胞悬液需悬浮在含10%FBS的1640培养基内且要保持4℃环境。
  
• 样本量：人、小鼠、大鼠新鲜EDTA抗凝全血1ml左右；人、小鼠、大鼠新鲜组织、新鲜组织制备成的单细胞悬液需保证细胞数在5×106以上。
  
• 实验步骤
  （1）将组织用眼科剪剪碎，放入含10ml 1640培养基（10%FBS，1%P/S，1mM EDTA）的15ml离心管中，37℃，300rpm剧烈震荡孵育1h。
  （2）将消化液经300目尼龙网过滤后，500g，5min离心，弃上清。
  （3）细胞沉淀用PBS洗涤一次500g，5min离心。
  （4）将每样本的细胞沉淀平均分到3个流式管内，按下表加入相应抗体，涡旋混匀，室温避光染色15min。
  
• 免疫细胞分型方案以及结果案例
  

组别	细胞类型	marker	Marker	marker
A	树突状细胞（DC cell）	CD45+	MHCⅡ+	CD11C+
巨噬细胞（Macrophages）	CD45+	F4/80+	CD11b+
中性粒细胞（Neutrophils）	CD45+	F4/80-	CD11b+

A组
DC cells （%）	Macrophages（%）	Neutrophils（%）
H1	15	17.7	35.8
H2	7.29	4.72	12.2
H3	9.22	13.1	21.1

组别	细胞类型	marker	Marker	marker
B	自然杀伤细胞（NK cells）	CD45+	CD3-	NK1.1+
调节性T细胞（Regulatory cell）	CD45+	CD3+	CD25+

B组
NK cells（%）	Regulatory T cells（%）
H1	6.56	14.3
H2	3.43	0.46
H3	4.45	1.09

组别	细胞类型	marker	Marker	marker
C	辅助性T细胞（T hepler cells）	CD45+	CD3+	CD4+
B淋巴细胞（B cells）	CD45+	CD3-	CD19+
抑制性T细胞（Tsuppressor cells）	CD45+	CD3+	CD8+

C组
T helper cells（%）	B cells（%）	T suppressor cells（%）
H1	20.5	7.55	25.3
H2	9.7	1.67	66.4
H3	8.49	12.1	48.9

今天先介绍1种大家比较常做的类型，后续再给大家介绍更多其他方向的应用，大家可以多关注哦！

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