细胞常用培养基介绍与培养液配置方法

HaHa

体外培养动物细胞已有近百年的历史，人工合成培养基的问世促进了细胞培养工作的发展。当粉剂合成培养基配置成液体后称为培养液，其主要成分是氨基酸、维生素、糖类、无机离子以及其他成分。合成培养基种类很多，常用的有十多种，目前使用最广泛的是RPMI 1640，MEM，DMEM和DMEM/F12。

RPMI 1640培养基：最初为培养小鼠白血病细胞的需要而制备。开始的配方适合悬浮细胞的生长，主要针对淋巴细胞，后经几次改良从RPMI 1630,1634而至1640，其成分较为简单。现发现它适应于多种类型细胞的生长，包括肿瘤细胞以及很多正常组织细胞体外培养。



MEM培养基：是最低必需培养基，主要是贴壁细胞的培养，修改配方后也可用于其他类型细胞培养，例如如无钙（Ca）MEM培养基可被用于悬浮细胞的培养，而Hank’s平衡盐的MEM培养基可被用于二倍体细胞的培养。



DMEM 培养基：DMEM细胞培养基是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)。而MEM中葡萄糖含量1000mg/L。DMEM-高糖型适合生长较快、附着性较差的肿瘤细胞，克隆细胞，也可用于DNA转染的转化细胞的培养；高糖型使细胞生长过快，不利于融合细胞的染色体稳定，做单抗细胞融合时，一般使用低糖型，DMEM-低糖型主要用于干细胞的培养。



DMEM/F12(1：1) 培养基：DMEM培养基营养成分浓度较高，F12培养液成分复杂，含有多种微量元素。DMEM和F12以1：1结合，称为DMEM/F12培养基，该培养基适用于血清含量较低条件下细胞培养，常用于细胞的克隆生长及干细胞培养。



培养液的配置方法大致相同，如下：

1.取一袋干粉培养基，将干粉培养基溶于欲配制液体总量2/3的三蒸水，冲洗包装袋2次倒入培养液中，加入磁性搅拌棒并置于磁力搅拌器上充分搅拌，确保培养基干粉充分溶解。
2.按照产品说明的要求和实验需要补加NaHCO3。
3.调整培养液pH值，用pH计或pH精密试纸观察调整结果达到pH7.2-7.4。
4.将上述溶液用0.22um微孔滤膜过滤除菌。
5.将过滤除菌的培养液分装于贴有标签的无菌贮液瓶中，加盖瓶塞，密封4℃冰箱存放。

注意：
1. 培养液配制后应进行无菌实验，以检测培养液是否有污染。
2.每批次配制液体数量以使用2周左右为宜，以免时间过长造成营养成分损失。



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