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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
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发表于 2024-9-2 12:46
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PCR 反应需要使用哪些试剂和设备?
原文地址:https://www.zhihu.com/question/605631763
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发表于 2024-9-2 12:46
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PCR (聚合酶链式反应)是一种对特定的DNA 片段在体外进行快速扩增的方法,即通过引物延伸核酸的某个区域而进行的重复双向DNA 合成。
参与扩增反应除了模板DNA以外,还需要引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、镁离子、缓冲液等。
PCR 实验除关键仪器PCR 仪外,还包括移液器、核酸蛋白测定仪、混匀仪、离心机和电泳仪等。在临床诊断实验室和检测实验室中,要求不同区域内配置专属的仪器设备,不同区域的仪器设备不能交叉使用,防止交叉污染。 (了解如何防止污染)
Eppendorf实验室:【干货分享】PCR 实验防污染大全
PCR 实验还需要用于样品DNA 的提取和保存的微量离心管以及PCR 耗材。建议选择PCR clean 级别的耗材。要能够保证良好的密封性、热传导性和抗热变形能力,提高实验的可重复性。
了解PCR工作流程:
Eppendorf实验室:干货满满!PCR 核心原理及工作流程
如何防止PCR的非特异性扩增:
Eppendorf实验室:如何防止PCR的非特异性扩增
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发表于 2024-9-2 12:46
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PCR系列产品在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)中主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物,广泛应用于遗传、生化、免疫、医药等领域,不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方。
PCR系列产品分为单管、八连管、板,那不同类型产品具体该怎么选择呢?
PCR单管
PCR单管:在样品量少时使用,可根据样本数量灵活使用。管身和管盖相连,易与微量离心管搞混,但不可混用。PCR管管壁较薄,有利于保证PCR扩增中热传导的速度和均匀,但也因此无法承受较大的离心力;微量离心管管壁比较厚,满足离心要求,但也导致了传热慢、不均匀。
PCR白色八连管
PCR透明八连管
PCR八连管:在样本量增大时可选择八连管。一般有透明和白色双色可选择,分别适用于普通PCR和qPCR。
PCR板
PCR板(彩色可拆卸)
PCR板:PCR板在批量处理样本时使用,适用性广,看使用不同自动化应用。板孔边有数字、字母编码,便于标记和识别。有透明、彩色透明和白色款,彩色和彩色透明款可用于普通PCR,不同颜色更有助于对样品进行分类管理;而qPCR实验建议使用白色款,由于qPCR需要实时定量检测荧光信号强度,需要更灵敏、精确的荧光信号传递,而白色PCR板可最大程度地反射荧光信号,减少孔间信号交叉污染,可优化实时荧光定量PCR的结果。
PCR板分为无裙边、半裙边、全裙边款,又该怎么选择呢?
PCR板的裙边是为了更好地适应自动化应用,可为仪器提供稳定的支持和机械耐受强度,并且移液过程中的稳定性也会更高。
无裙边:适用于大多数的PCR仪或qPCR仪,但不适用于自动化应用,移液过程中需要配合板托使用。
半裙边:可适配标签或应用条码,及自动化应用,且有着较好的移液稳定性。
全裙边:适用于自动化实验应用,也可适配标签及应用条码。机械强度较好,可适用于凸出模块的PCR仪,且移液过程中稳定性高。
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发表于 2024-9-2 12:47
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试剂准备区:仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。
试剂分装应在超净台中进行,扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。
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发表于 2024-9-2 12:48
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PCR(聚合酶链式反应)是一种广泛应用于分子生物学研究中的技术,下面是在PCR反应过程中常用的试剂和设备:
试剂:
模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;
Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
设备:
PCR仪:用于控制反应温度,保证PCR反应时不同温度环节的严格控制;
电泳槽:用于分离PCR扩增产物;
核酸提取仪:从组织样本中全自动提取核酸。
这些试剂和设备在PCR分子生物学技术中均是必不可少的,只有在有序齐全的基础上,才能进行PCR反应并得出准确结果。
qPCR试剂-PCR扩增试剂盒--细胞转染试剂-生物试剂采购平台
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雷达卡
发表于 2024-9-2 12:48
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试剂:DEPC水,分子生物学级的扩增反应混合液,质检试剂.
设备:冰箱,超净台,加样器,混匀器,天平,离心机,生物安全柜,温育仪,微量加样器,试管架,铝制饭盒,大瓷缸。
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