免疫诊断的原理有些什么？

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免疫诊断的原理有些什么？
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检验医师

我们先来了解一些关于免疫系统的基础概念
抗原：抗原是指能够刺激机体免疫系统，诱导免疫应答，并能与免疫应答产物(如抗体)发生特异性反应的物质。抗原一般是大分子物质，比如蛋白质和多糖类物质，相对分子量在10000以上。

表位：抗原的特异性取决于其分子表面的特殊序列及空间结构，称为表位或抗原决定簇。抗原的表位在免疫反应过程中能够被抗体分子识别而发生抗原抗体反应。

抗体：抗体是动物机体受到入侵的抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类游离在血液、淋巴液等体液并且能与该抗原发生特异性结合的一类特殊的球蛋白，称为免疫球蛋白。动物产生抗体由不同种类的Ig组成，其中大部分是IgG。免疫诊断正是利用抗原和抗体的特异性结合反应对微量抗原或抗体进行测定的方法。

有些免疫诊断的结果可以通过抗原抗体的结合反应直接观察，但是目前大多数免疫分析都是先对抗原或抗体进行同位素、酶、荧光等标记，然后通过测定放射性、吸光度或发光强度对抗原或抗体进行定性或定量测定。ELISA就是最为常用的酶标记免疫分析方法之一。

免疫诊断技术分类

免疫诊断从结果判断的方法学上可分为放射免疫法、酶联免疫吸附法（ELISA）、胶体金、时间分辨荧光、化学发光等不同类别。

放射免疫法

放射性同位素标记的抗原和非标记抗原同时与数量有限的特异性抗体之间发生竞争性结合（抗原－抗体反应）。因此测定标记抗原-抗体或标记抗原即可推出待测样品中抗原的数量。虽然该法灵敏度高、特异性强，但由于存在放射性污染，放射性试剂不稳定，操作风险大等缺点，目前已基本被淘汰。

ELISA

其原理是使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标复合物既有特性结合性又有酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅为依据定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的灵敏度。
ELISA法由于特异性好、灵敏度高、前处理简单、检测成本低，所以是目前使用最多的免疫学检测方法。但该法由于采用了具有生物活性的抗体和酶，所以分析结果的稳定性和可靠性易受到保存条件和检测环境的影响。

化学发光免疫分析法

1977年基于放射免疫分析的基本原理，将化学反应系统与免疫反应结合起来建立了CLIA，以检测抗原或抗体。测定步骤与ELISA基本相同，仅最后一步反应所用底物为发光剂，通过化学发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。CLIA的主要优点是灵敏度高、标记物有效期长、检测范围宽，可实现全自动化等，用化学免疫标记物代替放射性同位素，避免了使用放射性同位素的危害，操作简便，检测迅速。

时间分辨荧光免疫分析

此技术是超微量检测领域中利用抗原抗体特异性反应，以稀土离子为示踪材料的一类检测技术。检测时，加入标记物可使荧光增强100万倍，用时间分辨荧光仪测定其荧光强度，即可确定样品中检测物质的量。该方法作为一种新型的检测方法，具有测量灵敏度高、操作简便、快速、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染的优点，但由于灵敏度过高，样品中的杂质常导致产生假阳性或假阴性结果，另外，该法对仪器的依赖程度高，从而限制了TRFIA法在AFB1检测中的广泛应用。

纳米金标免疫分析法

是以纳米金为载体，通过物理吸附或者化学偶联将抗原或抗体分子包被在纳米金表面上，当样品中的抗体或者抗原和包被的抗原或者抗体形成免疫复合物时，根据显色情况来判断样品中是否存在被检物。胶体金是使用免疫胶体金层析技术的一种快速诊断试剂，具有简单（不需任何仪器设备）、快速（5~15分钟就可用肉眼观察到颜色鲜明的实验结果并可保存实验结果）、稳定（可室温保存18个月）、单人份随需测定等优点，可用于医院的急诊化验室、监护病房、门诊即时检验以及家庭、社区医疗、医师诊所等即时检验，可检测传染病、生殖、心血管、毒品、肿瘤等，发展潜力巨大。

免疫传感器分析法

免疫传感器以抗原或者抗体作为识别元件，将抗原抗体的反应信号经物理或化学换能器转换为相应的电信号从而实现检测的方法。免疫传感器分析法具有简便快速、选择性好、灵敏度高、仪器相对简单和适合联机批量检测等优点，但目前尚不能和基因芯片相比，其微型化和阵列化多通道实时检测是未来免疫传感器检测技术的发展方向。

蛋白芯片技术

生物芯片是20 世纪90 年代在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术。生物芯片也称为微阵列，其主要特点是高通量、微型化和自动化，是以微阵列的形式集成了大量的生物分子，能在短时间内对生物样品进行分析，快速准确地获取样品中大量的生物信息，因此，生物芯片有着广泛的应用，包括疾病诊断和治疗、药物筛选和食品安全检测监督等领域。目前松山湖高新区的博铼生技公司正是此细分领域的佼佼者。