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[分享] 技术|免疫诊断试剂的开发,免疫诊断试剂的验证EP.2

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发表于 2024-9-2 08:28 | 显示全部楼层 |阅读模式

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大家好,在上一篇文章当中,我们对免疫诊断试剂的验证方法进行了初步的了解,今天我们将来了解一下关于免疫诊断试剂的开发。

这个时候,应该有同学要问了,这不是在讲免疫诊断试剂验证的文章嘛,为什么要讲开发呢?这是因为开发是围绕设定目标进行的,而验证是来证明开发成果达到了目标,所以,如果对开发完全没有认识,那么验证方案设计也就是空中楼阁。

这一点在免疫诊断试剂项目立项时特别明显,项目立项过程中所谈到的可行性研究,就涉及到一个检测方法是否能实现其预期目的的可能性,以及该检测方法的性能特征是否适合研究的需要。

而整个免疫诊断试剂的开发和优化活动,都是为了让研发人员认为这个试剂已经「准备好进行验证」了,所以这意味着在开发过程中产生的大量数据,可以用来证明试剂的潜在可靠性和对其预期目的的适用性。

在试剂开发过程中应产生以下信息:

  • 关键试剂组分的选择和稳定性;
  • 检测形式的选择(抗体、稀释剂、平板、检测系统等);
  • 标准曲线模型的选择;
  • 样本类型的选择;
  • 试剂的特异性;
  • 样本制备和初步性能评估。

免疫诊断试剂开发阶段的目标是建立一个能够持续产生的,结果可靠的试剂,并且在这个基础上最终形成一个验证计划,并确立准确度和精确度的可接受标准。

因此,诊断试剂的开发可能是最关键的部分,因为在这里出现的错误,如使用不合适的免疫原、质量差的抗体(亲和力低、有交叉反应的倾向、不稳定)、不理想的检测格式、使用的浓度不正确以及不理想的测试成分和条件,都会大大影响整个试剂性能。

虽然免疫诊断试剂开发的初期阶段,研发人员或尝试许多不同的外购原材料,如抗体等等,但很多情况下,这些原材料都不是很适用,为了能够实现项目立项时确定的目标,有时需要考虑自己在「内部」生产这些原材料。

在后一种情况下,我们更加需要对开发有所了解。



花时间选择一个好的免疫原会节省大量的检测开发时间,并产生更好质量的免疫诊断试剂。

所选择的免疫原最好是纯的,并且结构上与目标分析物相同,如果想开发一种蛋白质分析物的检测方法,免疫原可以是整个蛋白质或来自该蛋白质高度特异区域的肽序列。

因此,我们应事先对目标分析物及其特性进行研究,以帮助设计一个能产生高特异性抗体的免疫策略。

如果开发一种用于免疫的合子-载体共轭物,应生产一组共轭物以帮助筛选过程。



如果在项目的范围内,最好是为所需的诊断试剂开发一个定制的抗体,而不是用一个已经有的抗体来开发一个检测方法,在很多情况下,这可能是一种最优的选择。

在产品开发的过程中,我总是建议「由终及始」,这是一个优秀的产品研发人员思维模型,在开始研发前,先要问自己这个试剂是用来做什么的?将在哪里进行测试?样本类型是什么?需要什么样的特异性和敏感性?

在进行抗体生产之前,回答这些问题和其他问题(具体可见EP.1的表1),就可以完善免疫原和选择策略,以提供最好的方法来产生高质量的抗体,并将其纳入所需的免疫诊断试剂和平台。

虽然多克隆抗体和单克隆抗体是目前诊断学中最常用的抗体,但重组抗体的重要性也在增加。

重组抗体选择方法的优势,如使用噬菌体作为选择方法,提供了一个便捷的途径,使富集的抗体池在所需的检测基质(如血液、血清、食物提取物或低百分比有机溶剂的缓冲液,如PBS加5%(v/v)甲醇)、温度(噬菌体可以在一定的温度范围内选择以适应检测需要)、pH、灵敏度(引入严格性使高亲和力克隆偏离)甚至时间(如选择更快的结合率)中的性能增强。



在选择方法学时,应考虑很多因素。

影响因素可能包括大小(aptens一般不适合夹心试验)、标记(直接或间接试验)、稳定性(抗体稳定性和分析物稳定性)和平台。

在许多情况下,这可能是一个根据经验测试几种检测方法学并评估最佳方法的问题。无论选择哪种检测方式,都应该对缓冲液和条件进行优化,在选择方法学的过程中,我们应该仔细考虑下述问题:

  • 关于方法学选择的信息(可能包括不同方法学的比较数据);
  • 缓冲液和涂层浓度的评估;
  • 最佳抗体浓度、体积和孵化时间的经验性测试;
  • 初步的检测样本范围估计。

好了,以上就是今天分享的全部内容,如果大家有什么疑问,欢迎在后台给我们留言,或者加入我们一起讨论~

原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/452760567
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