重叠延伸PCR介绍

Rose

来源：知乎
重叠延伸PCR介绍
重叠延伸PCR（Overlap Extension PCR）或“SOEing”是一种基于聚合酶链反应的DNA序列重组方法，无需依赖限制位点，可在体外直接产生突变的DNA片段。通过修改加入引物 5′端中的序列，可使任何一对聚合酶链反应产物的一端具有共同的序列。在聚合酶链反应条件下，共同序列可使两个不同片段的链相互杂交，形成重叠。通过DNA聚合酶对重叠部分进行延伸，就能得到重组分子。与操纵基因序列的传统方法相比，这种功能强大、技术简单的方法具有许多优势。
这种将突变引入PCR片段中心的技术，使PCR诱变变得更加灵活。这种方法的固有错误频率很低，因此可以广泛使用。这种方法的一种改进方法可以通过重叠延伸将两个不同基因的片段重组或 "拼接 "在一起，我们将这一过程称为“重叠延伸基因拼接”（SOE）或 "基因SOEing"。


聚合酶链反应生成两个片段（AB 和 CD），这两个片段的末端因错配而发生改变，从而共享一个同源区。当这两个片段混合、变性和再退火时，片段 AB上链的3′端退火到片段CD下链的 3′端，这种重叠可以扩展形成重组产物。重叠区由引物“b”和“c”决定，只要寡聚体互补，就可以包含任何序列。当该技术用于定点诱变时，碱基变化就会在这一区域发生。或者，将重叠部分设计成两个片段之间的 "整齐 "连接，而不包含新的序列。


产物AB由基因I通过PCR扩增而来，片段CD由基因II扩增而来。引物“b”和“c”是SOEing引物，用于修饰两个PCR产物的末端，使它们具有相同的序列。当这些PCR产物在PCR条件下混合、变性和再变性时，AB的上链和CD的下链就会重叠，并相互充当引物，如折线矩形内所示。当这种重叠在聚合酶的作用下延伸时，重组产物就形成了。在SOE反应中加入外部引物“a”和“d”会使重组产物在形成后立即进行 PCR 扩增。

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/695013450