PCR实验结果总不对？耗材是个坑！

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作者：知乎
“众所周知，PCR是生化实验室基本的实验方法。”实验结果却总是不尽如意，有可能是PCR塑料耗材微量的污染，或者是抑制剂的引入造成的实验干扰。还有一个很重要的原因：耗材选择不当也会对实验结果造成很大的影响。
影响PCR实验结果得原因有很多：通常有以下7种。
1、引物：引物是PCR 特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA 互补的程度；
2、 酶及其浓度 ；
3、dNTP的质量与浓度；
4、模板（靶基因）核酸；
5、Mg2+浓度；
6、温度与时间的设置；
7、循环次数；
8、设备、耗材等。
在众多影响因素中，耗材是一个非常重要、也极容易被忽视的因素之一。
PCR耗材类型众多：8连管、低容管、标准管、无裙边、半裙边，全裙边，升孔缘等一系列的PCR及qPCR板，选择起来非常困难，在这中间存在许多具有共性的问题，小析姐对这些问题进行了汇总。我们一起来看看大家在选用 PCR耗材时都遇到了哪些问题，又该如何解决呢？


常见问题及解决办法
一、PCR耗材为什么一般都是PP材质的呢？
答：PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯（PP）材质，因其为生物学惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有着良好的化学耐性，及温度耐受性（可121度高压灭菌，也可以承受热循环过程中的温度变化）。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触，因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。
二、不同体积的PCR 管/板，我该怎么选呢？
答：PCR管的体积大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上，优先推荐选用低容管哦。因为低容反应管/板有着较小的上方空间，可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时，需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降，溢出及交叉污染，而加样过少可能会造成样品蒸发损失。大家可依据具体的实验要求选用更合适的产品。
常见反应管规格及体积：
单管/联管：0.5mL，0.2mL， 0.15mL
96孔板：0.2mL， 0.15mL
384孔板：0.04mL
三、为何有的PCR管是平盖，有的是凸盖呢？
答：当样品量较少时，都会优先选用单管或者连管。但是当反应体积需求较大时，单管可达到0.5mL呢。平盖和凸盖各有优点呢，可参考下面的信息。



四、不同颜色的PCR 管/板，我该怎么选呢？
答：对于普通的PCR反应选用透明或者彩色的PCR管都是可以的，而彩色透明的PCR管更有助于进行样品分类管理哦。



但qPCR更推荐选用优质的白色PCR耗材。
由于qPCR需要实时定量检测荧光信号强度，更需要灵敏、精确的荧光信号传递。与传统的透明PCR产品相比，白色PCR产品可最大程度地反射荧光信号，减少孔间信号交叉污染，可优化实时荧光定量PCR的结果。



五、PCR板/管材质厚度不一，是不是厚点的稳定性更好呢？
答：一般分为无裙边、半裙边、全裙边。


无裙边板：可适用于大多数的PCR仪或qPCR仪，但不适用于自动化、应用。移液过程中稳定性不高，需要配合板托使用。
半裙边板： 可适配标签或应用条码，及自动化应用，且有着较好的移液稳定性。
全裙边板： 非常适用于自动化实验应用，也可适配标签及应用条码。机械强度较好，可适用于凸出模块的PCR仪，且移液过程中稳定性高。
六、96和384孔板切角和标识不同？
答：A切角：PCR板的切角位置选择取决于适配仪器要求，便于定位。



B标识：PCR板的数字字母标记有助于识别单个孔及样品位置。
一般为 凸出的颜色数字标识或者印刻标识。对于一些自动化应用实验，印刻标记的反应板密封性会更好。
七、为什么有的PCR板孔缘是升起的?
答：常见的PCR板有平孔缘和加高孔缘两种。


平孔缘的反应板，可适用于大多数的PCR仪。
升孔缘的反应板，便于封膜，可降低样品间的交叉污染风险。
八、PCR封板膜有多种类型，哪种好？
答：根据具体的PCR实验要求选用适配的高质量封板膜，不仅有效保护样品，防止污染，还提供可信赖的实验检测数据。




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