关于 CCK8，师姐的这些经验你有听过吗？

生物科研实验室

1 种板细胞量：
  铺板时，要依据培养时长以及细胞生长速度来确定接种的细胞数量，而并非固定于某一个数值。若细胞生长快速，培养时间较长，那就应当少种些细胞，避免在测量过程中有部分孔已长满,在后续检测时细胞过于密集而影响结果；而对于生长较慢的细胞，接种密度则应适当提高，否则可能难以观察到明显的变化。在进行预实验时，可以设置一系列不同密度梯度进行尝试，找到最适合该细胞类型和实验目的的密度范围。
2 空白对照：
  除开对照组外，切记要设定一个不含细胞的空白培养基孔！在不含细胞的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验（细胞毒性实验）时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度作为空白对照。
3 铺板均匀的办法：
      96 孔板无需润板，直接添加 100ul 细胞悬液，不建议先加 50ul 培养基再添加 50ul 细胞悬液。在制备细胞悬液的过程中，需多次轻柔吹打，保证细胞悬液均匀混合，减少细胞团块的形成。
4 两种添加 CCK-8 的方式：
① 直接向各个孔内加入 10 微升的 CCK-8 原液。其缺点为：10 微升的 CCK-8 量较少，或许会因黏附在孔壁上而产生误差。② 配置含有 10% CCK-8 的培养基，并通过换液的形式进行添加。但要注意防止产生气泡，可利用负压吸引器或者注射器吸走培养基，也能用大枪头套小枪头。添加时也要留意不可产生气泡，且不要对着底部直接打出液体。
5 反应时间：
  在 1 至 4 小时内均可进行测量。倘若每天测一次以制作增殖曲线，需记得每天都处理相同时间。
6 复孔：
  种板时可多设置一些复孔，例如 5 个以上。如此能提升实验的可靠性。