ＨＥ染色不良的常见问题与对策（二）

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[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]显微镜下见切片内有大量水珠

[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]原因:切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水,导至二甲苯透明中性树胶封固后残留大量水分。

对策:移去盖玻片,用二甲苯溶解封固剂如中性树胶。将切片置入新鲜的无水乙醇换几道。待切片重新脱水完全后,用新二甲苯透明,中性树胶封固。所有用于脱水和透明的液体,在使用一定时间以后,应即时更换。
九、光镜下切片某些区域难以聚焦
原因:盖玻片上可能有封固切片的封固剂。

对策:移去盖玻片,重新用干净的盖玻片封片。检查切片封片方法,是人工手工封法,还是机器自动封法,如有问题及时调整。
十、封固剂从盖玻片与载玻片之间的缝隙回缩
原因:盖玻片弯曲或不平整;封固剂含二甲苯过多,稀释过度。

对策:移去盖玻片,重新找一张盖玻片,用干净的封固剂封片。如用手工封片法,每天保证盛装封固剂的容器,在封固结束的时候盖紧盖子。尽量使用小的容器盛装封固剂,一旦封固剂太粘稠,就可以废弃不再使用。
十一、水和玻片呈现乳白色混浊改变
原因:切片从脱蜡的二甲苯经过梯度乙醇进入水溶液时,水和玻片呈现乳白色混浊改变，是用于脱蜡的二甲苯没有被乙醇洗干净。

对策:更换洗涤二甲苯的乙醇液体,把切片重新放回无水乙醇,脱去玻片上的水分。
十二、细胞核灰蓝
原因:可能的原因是由于组织处理温度过高、过热,在石蜡停留的时间过长；或者固定时间太短,接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。

对策:理论上来说,加热处理仅在组织浸蜡步骤才使用,组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理,完成浸蜡处理后的组织,可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中,冷却凝固,以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好,脱水最好能从低浓度的乙醇开始。
十三、从小斑点到大面积区域散布，细胞核染色质不够细致
原因:HE染色不规则或不均匀, 从小斑点到大面积区域, 散布切片各处,细胞核染色质不够细致。由于使用密闭式组织处理机故障,如密闭不严,导至组织浸蜡时含有水和(或)固定剂。

对策:如果使用开放式组织处理模式,在相对湿度较高的地方,用甲苯替代二甲苯。如果使用密闭式组织处理模式,经常仔细检查仪器设备的各项功能是否完好,一旦发现密闭垫圈老化,应及时更换。
十四、裸核改变
原因:切片中出现类似色素样的点状结晶和黑色光滑的细胞核，切片封片前放置在空气中时间太长,以至于二甲苯挥发切片干燥所致。

对策:在染色过程中不宜让切片干涸，染色后不要直接把切片置入烤箱烤干或吹风吹干，待自然干燥后中性树胶封固即可。或者将出现“裸核”的切片，移去盖玻片，经透明剂稍浸片刻后取出，适当晾干，中性树胶封固，“裸核”即消失。

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