微生物学常用培养基配方大全

生物科研实验室

1.牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用）

牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaC1 10 g/L，琼脂1.5~2.0 g/L，pH 7.0~7.2。121℃灭菌20 min。JSENB品牌微生物培养原料一站供应。

2.高氏(Gause)1号培养基(培养放线菌用)


可溶性淀粉20 g/L，KNO3 1 g/L，NaCl 0.5 g/L， K2HPO4 0.5 g/L，MgSO4 0.5 g/L， FeSO4 0.01 g/L，琼脂 20 g/L，pH 7.2~7.4。

配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000 ml。121℃灭菌20 min。

3. 查氏(Czapek)培养基(培养霉菌用)



NaNO3 2 g/L， K2HPO4 1 g/L，KC1 0.5 g/L，MgSO4 0.5 g/L，FeSO4 0.01 g/L，蔗糖30 g/L，琼脂15~20 g/L，pH自然。121℃灭菌20 min。

4.马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用)



葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，K2HPO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，1/3000孟加拉红(rose bengal，玫瑰红水溶液)100 ml，琼脂15~20 g，蒸馏水800 ml,115℃灭菌 30 min。

临用前加入过滤除菌的0.03%链霉素稀释液100 ml，使链霉素的终浓度为30 μg/ml。

5.马铃薯培养基(简称 PDA)(培养真菌用)

马铃薯200 g/L，蔗糖(或葡萄糖)20 g/L，琼脂15~20 g/L，pH自然。121℃灭菌30min(若为葡萄糖则在115℃灭菌30 min)。

马铃薯去皮，切成块煮沸30 min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000 ml。

6.麦芽汁琼脂培养基(培养真菌用)

1)取大麦或小麦若干，洗净后浸泡6~12 h，置15℃阴暗处，上面盖纱布一块，每日早、中、晚各淋水一次，待其发芽，麦根伸长至麦粒的两倍时，停止发芽，摊开晒干或烘干备用。

2)将干麦芽磨碎，1份麦芽加4份水，置65℃水浴中糖化3~4 h，可用碘滴定糖化程度。加水约20 ml调匀，至产生泡沫，然后倒在糖化液中搅拌煮沸。

3)煮沸后的糖化液用4~6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用蛋白澄清，即将一个鸡蛋白加水约20 ml，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

4)将滤液稀释到5~6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30 min。

7.无氮培养基(培养自生固氮菌、钾细菌等)

甘露醇(或葡萄糖)10 g/L，K2HPO4 0.2 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，NaC1 0.2 g/L，CaSO4·2H2O 0.2 g/L，CaCO₃ 5 g/L，pH 7.0~7.2。115℃灭菌30 min。

8.半固体肉膏蛋白胨培养基

肉膏蛋白胨液体培养基100 ml，琼脂0.35~0.4 g，pH 7.6，121℃灭菌20min。

9.合成培养基

偏磷酸铵1 g/L，KCl 0.2 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，豆芽汁10 ml，琼脂20 g/L。pH 7.0。

加12 ml 0.04%的溴钾酚紫(pH 5.2~6.8，颜色由黄变紫，作指示剂)。121℃灭菌 20 min。

10.豆芽汁蔗糖(或葡萄糖)培养基

黄豆芽100 g/L，蔗糖(或葡萄糖)50 g/L，pH自然。

称新鲜豆芽100 g放入烧杯中，加水1000 ml，煮沸约30 min，用纱布过滤。加水补足原量，再加入蔗糖(或葡萄糖)50 g，煮沸熔化。121℃灭菌20 min或115℃灭菌30 min。

11.油脂培养基

蛋白胨10 g/L，牛肉膏5 g/L，NaCl 5 g/L，香油或花生油10 g/L，1.6%中性红水溶液1 ml，琼脂15~20 g/L，pH 7.2。121℃灭菌 20 min。

配制时，调好pH后，再加入中性红，分装时，需不断搅拌，使油滴均匀分布于培养基中。

12.淀粉培养基

蛋白胨10 g/L，牛肉膏5 g/L，NaC1 5 g/L，可溶性淀粉2 g/L，琼脂15~20 g/L。JSENB品牌微生物培养原料一站供应，溶解淀粉时可参照高氏1号培养基的配制方法。

13.明胶培养基

牛肉膏蛋白胨液100 ml，明胶12~18 g。

在水浴锅中将上述成分熔化，不断搅拌。溶化后调pH 7.2~7.4。121℃灭菌30 min。

14.蛋白胨水培养基(用于吲哚试验)

蛋白胨10 g/L，NaCl 5 g/L，pH 7.6。121℃灭菌 20 min。

15.糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验)

蛋白胨水培养基1000 ml，1.6%溴钾酚紫乙醇溶液1~2 ml，pH 7.6。

另配制20%糖溶液(葡萄糖、乳糖、蔗糖等)各10 ml。

1)将上述含指示剂的蛋白胨水培养基(pH 7.6)分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管，使其充满培养液。

2)将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水于121℃灭菌20 min，糖溶液则于115℃灭菌30 min。

3)灭菌后，以无菌操作将浓度为20%的无菌糖溶液加入蛋白胨水中(按每10 ml培养基中加入20%的糖液0.5 ml，使其终浓度为1%)。

16.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V-P反应和甲基红试验)

蛋白胨5 g/L，葡萄糖5 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，pH 7.0~7.2。115℃灭菌30 min。

17.麦氏(Meclary)琼脂(培养酵母菌)

葡萄糖1 g/L，KCl 1.8 g/L，酵母浸膏2.5 g/L，NaAc 8.2 g/L，琼脂15~20 g/L。115℃灭菌 20 min。

18.柠檬酸盐培养基

NH4H2PO4 1 g/L， K₂HPO4 1 g/L， NaCl 5 g/L，MgSO4 0.2 g/L，柠檬酸钠2 g/L，琼脂15~20 g/L，1%溴麝香草酚蓝乙醇液10 ml。

配制方法：上述各成分加热溶解后，调pH至6.8，然后加入指示剂，摇匀后脱脂棉过滤。制成后为黄绿色，不要过碱，分装试管，121℃灭菌20 min。

19.乙酸铅培养基(用于硫化氢试验)

pH 7.4的牛肉膏蛋白胨琼脂100 ml，硫代硫酸钠0.25 g，10%乙酸铅水溶液1 ml。

配制方法：将牛肉膏蛋白胨琼脂100 ml加热熔解，冷却至60℃时加入硫代硫酸钠0.25 g，调至pH 7.2，分装于三角瓶中，115℃灭菌15 min。取出后待冷却至55-60℃，加入10%无菌乙酸铅水溶液1 ml，混匀后倒入灭菌试管或平板中。

20.血琼脂培养基

pH7.6的牛肉膏蛋白胨琼脂100 ml，脱纤维羊血(或兔血)10 ml。

配制方法：将牛肉膏蛋白胨琼脂加热熔化，待冷却至50℃时，加入无菌脱纤维羊血(或兔血)摇匀后倒平板或制成斜面。37℃过夜检查无菌生长即可使用。

21.玉米粉蔗糖培养基

玉米粉60 g/L，K₂HPO4 3 g/L，维生素B1 0.1 g/L，蔗糖10 g/L，MgSO4·7H2O 1.5 g/L。121℃灭菌30 min。

维生素B1溶液过滤除菌后再加入灭菌后的培养基中。

22.酵母膏麦芽汁琼脂

麦芽粉3 g/L，酵母浸膏0.1 g/L。121℃灭菌30 min。

23.复红亚硫酸钠培养基(远藤氏培养基)(用于水体中大肠菌群测定)

蛋白胨10 g/L，乳糖10 g/L，K2HPO4 3.5 g/L，琼脂20~30 g/L，5%碱性复红乙醇溶液20 ml。

配制方法：先将琼脂加入900 ml蒸馏水中，加热熔解，再加入K₂HPO4及蛋白胨，充分溶解后，补足蒸馏水至1000 ml，调pH至7.2~7.4。加入乳糖，混匀溶解后，115℃灭菌20 min。称取Na2SO3置一无菌空试管中，加入无菌水少许使之溶解，再在水浴中煮沸10 min后，立刻滴加于20 ml 5%碱性复红乙醇常液中，直至深红色褪成淡粉红色为止。

将此Na2SO3与碱性复红的混合液全部加至上述已灭菌的并仍保持熔化状态的培养基中，充分混匀，倒平板，放冰箱中备用，储存时间不宜超过2周。

24.伊红美蓝培养基(EMB培养基)(用于水体中大肠菌群测定和细菌转导)

蛋白胨水培养基100 ml，20%乳糖溶液2 ml，2%伊红水溶液2 m，0.5%美蓝水溶液1 ml。

配制方法：蛋白胨水培养基（pH 7.6）灭菌并冷却至50℃左右，分别加入上述量的已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝水溶液，摇匀后倒平板。乳糖于115℃灭菌20 min 即可。

在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖，其余成分不变。

25.乳糖蛋白胨培养液(用于多管发酵法检测水体中大肠菌群)

蛋白胨10 g/L,牛肉膏3 g/L，乳糖5 g/L，NaC1 5 g/L，1.6%溴甲酚紫乙醇客液1 ml/L，pH 7.2~7.4。

配制方法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000 ml蒸馏水中，调pH，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1 ml，充分混匀后分装于有倒置小管的试管中。115℃灭菌 20 min。

26.石蕊牛奶培养基

奶粉100 g/L，石蕊0.075，pH 6.8。121℃灭菌15 min。

27.基本培养基

K₂HPO4 10.5 g/L，KH2PO4 4.5 g/L，(NH4)2SO4 1 g/L，二水合柠檬酸钠0.5 g/L，121℃灭菌20 min。

灭菌后加入：糖(20%)10 ml，维生素B1(硫胺素)(1%) 0.5 ml，MgSO4·7H2O(20%)1 ml,链霉素(50 mg/ml)4 ml(终浓度200 μg/ml)，氨基酸(10 mg/ml)4 ml(终浓度40 μg/ml)，pH自然。

28.庖肉培养基

1)取已去肌膜、脂肪的牛肉500 g，切成小方块，置于1000 ml蒸馏水中，以弱火煮1 h，纱布过滤，挤出肉汁备用。肉渣用绞肉机绞碎，或用刀切成细粒。

2)肉汁加蒸馏水至2000 ml，加入蛋白胨20 g，葡萄糖2 g，NaCl 5 g及绞碎肉渣，置烧瓶摇匀后加热使蛋白胨溶化。

3)取上清液测量pH，并调至8.0，121℃灭菌15 min，之后补足蒸发的水分，重新调整pH至8.0，再煮沸10~20 min，补足水量后调整pH为7.4。

4)将烧瓶内容物摇匀，溶液和肉渣分装于试管中，肉渣占培养基的1/4左右，经121℃灭菌 15 min后备用。如当日不用，应以无菌操作加入已灭菌的石蜡凡士林以隔绝氧气。

29.乳糖牛肉膏蛋白胨培养基

乳糖5 g/L，牛肉膏5 g/L，酵母膏5 g/L，蛋白胨10 g/L，葡萄糖10 g/L，NaC1 5 g/L，琼脂粉15 g/L，pH 6.8。

30.马铃薯牛乳培养基

配制方法：200 g马铃薯(去皮切块)煮出汁，脱脂鲜乳100 ml，酵母膏5 g，琼脂粉15 g，加水1000 ml，调节pH至7.0。制平板培养基时，牛乳与其他成分分开灭菌，倒平板前再混合。

31.尿素琼脂培养基

尿素20 g/L，NaCl 5 g/L，K₂HPO4 2 g/L，蛋白胨1 g/L，酚红0.012 g/L，琼脂15 g/L，pH 6.8~7.0。JSENB微生物培养原料一站供应。

配制方法：在100 ml蒸馏水或去离子水中，加入除琼脂外的上述所有成分，混合均匀后过滤除菌。将琼脂加入900 ml蒸馏水中加热煮沸，121℃灭菌15 min。冷却至50℃混匀，分装于灭菌的试管或平皿中。

32.RCM 培养基(强化梭菌培养基)(用于厌氧菌培养)

酵母膏3 g/L，牛肉膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，可溶性淀粉l g/L，葡萄糖5 g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5 g/L，NaCl 3 g/L，NaAc 3 g/L，刃天青3 mg/L，pH 8.5。121℃湿热灭菌30 min。

33.TYA 培养基(用于厌氧菌培养)

葡萄糖40 g/L，牛肉膏2 g/L，酵母膏2 g/L，胰蛋白胨6 g/L，NH4Ac 3 g/L，KH2PO4 0.5 g/L， MgSO4·7H2O 0.2 g/L，FeSO4·7H2O 0.01 g/L,水1000 ml， pH 6.5，121℃湿热灭菌30 min。

34.玉米醪培养基(用于厌氧菌培养)

玉米粉65 g，自来水1000 ml，混匀，煮10 min成糊状，pH自然，121℃灭菌30 min。

35.中性红培养基(用于厌氧菌培养)

葡萄糖40 g/L，胰蛋白胨6 g/L，酵母膏2 g/L，牛肉膏2 g/L，NH4Ac 3 g/L，KH2PO4 5 g/L，中性红0.2 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，FeSO4·7HO 0.01 g/L，水1000 ml，pH 6.2，121℃湿热灭菌30 min。

36.CaCO3明胶麦芽汁培养基(用于厌氧菌培养)

麦芽汁(6波美度)1000 ml，水1000 ml，CaCO3 10 g，明胶10 g，pH 6.8，121℃灭菌30 min。

37.BCG牛乳培养基(用于乳酸发酵)

A溶液：脱脂乳粉100 g，水500 ml，加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液1 ml，80℃灭菌20 min。

B溶液：酵母膏10 g，水500 ml，琼脂20 g，pH 6.8，121℃灭菌20 min。

以无菌操作趁热将A、B溶液混合均匀后倒平板。

38.乳酸菌培养基(用于乳酸发酵)

牛肉膏5 g/L，酵母膏5 g/L，蛋白胨10 g/L，葡萄糖10 g/L，乳糖5 g/L，NaCl 5 g/L，pH6.8。121℃湿热灭菌20 min。

39.乙醇发酵培养基(用于乙醇发酵)

蔗糖100 g/L，MgSO4·7H2O 5 g/L, NH4NO3 5 g/L，20%豆芽汁20 ml。KH2PO4 5 g/L，pH自然。

40.柯索夫培养基(用于钩端螺旋体培养)

优质蛋白胨0.4 g，NaCl 0.7 g，KCl 0.02 g，NaHCO3 0.01 g， CaCl2 0.02 g， KH2PO4 0.09 g，NaH2PO4 0.48 g，蒸馏水500 ml，无菌兔血清40 ml。

配制方法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调pH至7.2，121湿热灭菌20 min，冷却后加入无菌兔血清，制成8%血清溶液，然后分装试管(5~10 ml/管)，56℃水浴灭活1 h后备用。

41.加倍肉汤培养基(用于细菌转导)

牛肉膏6 g/L，蛋白胨20 g/L，NaCl 10 g/L，pH 7.4~7.6。

42.半固体素琼脂(用于细菌转导)

琼脂1 g，水100 ml，121℃湿热灭菌30 min。

43.豆饼斜面培养基(用于产蛋白酶霉菌菌株筛选)

豆饼100 g加水5~6 倍，煮出滤汁100 ml，汁内加入KH2PO4 0.1 g，MgSO4 0.05 g，(NH4)2SO4 0.05g，可溶性淀粉2 g，琼脂2~2.5 g，pH 6.0。

44.酪素培养基(用于蛋白酶菌株筛选)

A液：称取Na2HPO4·7H2O 1.07 g，干酪素4 g，加适量蒸馏水，并加热溶解。

B液：称取KH2PO4 0.36g，加水溶解。

酪素水解液：1 g酪蛋白溶于碱性缓冲液中，加入1%的枯草芽孢杆菌蛋白酶25 ml加水至100 ml，30℃水解1h。用于配制培养基时，其用量为1000 ml培养基中加入100 ml以上水解液。

A、B液混合后，加入酪素水解液0.3 ml，加琼脂20 g，最后用蒸馏水容至1000 ml。

45.细菌基本培养基(用于筛选营养缺陷型)

Na2HPO4·7H2O 1 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，葡萄糖5 g/L，NaCl 5 g/L，K2HPO4 1 g/L，pH 7.0。115℃湿热灭菌30 min。

46.YEPD 培养基(用于酵母原生质体融合)

酵母粉10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，pH 6.0。115℃湿热灭菌20 min。

47.YEPD 高渗培养基(用于酵母原生质体融合)

用0.6 mol/L的NaCl配制YEPD培养基，3%琼脂。

48.YNB基本培养基(用于酵母原生质体融合)

葡萄糖10 g/L，(NH4)2SO4 1 g/L，K₂HPO4 0.125 g/L，KHPO4 0.875 g/L，KI 0.0001 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，CaCl2·2H2O 0.1 g/L，NaC1 0.1 g/L，微量元素母液1 ml，维生素母液1 ml(母液均按常规配制)，pH 5.8~6.0。

49.YNB高渗基本培养基(用于原生质体融合)

用0.6 mol/L NaCl配制YNB基本培养基。

50.酚红半固体柱状培养基(用于检查氧与菌生长的关系)

蛋白胨1 g/L，葡萄糖10 g/L，玉米浆10 g/L，琼脂7 g/L，pH 7.2。

调好pH后，加入1.6%酚红溶液数滴至培养基为深红色，再分装于大试管中，期装量约为试管高度的1/2，115℃灭菌20min。细菌在此培养基中利用葡萄糖生长产酸，使酚红从红色变成黄色，在不同部位生长的细菌，可使培养基的相应部位颜色改变。注意培养时间不要太长，否则酸扩散以至于不能正确判断结果。通过改变琼脂用量配制为固体或半固体培养基。

51.LB 培养基

胰蛋白胨（JS0688）1%(m/v)，酵母浸出粉（JS0685）0.5%(m/v)，NaCl 1%(m/V)。

分别称量胰蛋白胨（JS0688）10 g，酵母浸出粉（JS0685）5 g，NaCl （JS0060）10 g，置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。滴加5 mol/L NaOH(约0.2ml)调节pH至7.0。加去离子水将培养基定容至1 L，高温高压灭菌，4℃保存。

52.LB/Amp 培养基

配制好LB培养基后，每升中加入1ml 100 mg/ml的Ampicillin(使培养基中氨苄青霉素的终浓度为100 μg/ml)后均匀混合。4℃保存。JSENB微生物培养原料一站供应。

53.TB培养基

胰蛋白胨1.2%(m/V)，酵母浸出粉2.4%(m/V)，甘油0.4%(V/V)，KH₂PO4 17 mmol/L，K₂HPO4 72 mmol/L。

配制磷酸盐缓冲液(0.17 mol/L KH₂PO4，0.72 mo/L K₂HPO4)100 ml，灭菌备用。称取胰蛋白胨（JS0688）12 g，酵母浸出粉（JS0685）24 g，甘油4 ml置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解后，高温高压灭菌。待溶液冷却至60℃以下时，加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液，混合均匀4℃保存。

54.TB/Apm 培养基

TB培养基配制好后，每升加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)。

55.SOB 培养基

胰蛋白胨（JS0688）2%(m/v)，酵母浸出粉（JS0685）0.5%(m/V)，NaC1 0.05%(m/V)，KC1 2.5 mmol/L，MgCl2 10 mmol/L。

1)配制250 mmol/L KCl溶液。在90 ml的去离子水中溶解1.86 g KC1后，定容至100 ml。

2)配制2 mol/L MgCl2溶液。在90 ml的去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，灭菌。

3)称取胰蛋白胨（JS0688）20 g，酵母浸出粉（JS0685）5 g，NaC1 0.5g，置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。量取10 ml 250 mmol/L KCl溶液，加入烧杯中。滴加5 mol/L NaOH溶液(约0.2 ml)，调节pH至7.0。加入去离子水将培养基定容至1 L。高温高压灭菌后，4℃保存。

4)使用前加入5 ml 灭菌的2 mol/L MgCl2溶液。

56.SOC培养基

胰蛋白胨（JS0688）2%(m/V)，酵母浸出粉（JS0685）0.5%(m/V)，NaCl （JS0060）0.05%(m/V)，KC1 2.5 mmol/L，MgCl2 10 mmol/L，葡萄糖20 mmol/L。

1)配制1 mol/L 葡萄糖溶液：将18 g葡萄糖溶于90 ml去离子水中，充分溶解后定容至100 ml，用0.22 μm滤膜过滤除菌。

2)向100 ml SOB培养基中加入除菌的1 mol/L葡萄糖溶液2 ml，均匀混合后于4℃保存。

57.2x YT培养基

胰蛋白胨（JS0688）1.6%(m/V)，酵母浸出粉（JS0685）1% (m/V)，NaC1 0.5%(m/V)。

称取胰蛋白胨（JS0688）16 g，酵母浸出粉（JS0685）10 g，NaCl （JS0060）5 g置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。滴加1 mol/L KOH，调节pH至7.0。用去离子水将培养基定容至1 L。高温高压后，4℃保存。

58.Φbxbroth培养基

胰蛋白胨（JS0688）2%(m/V)，酵母浸出粉（JS0685）0.5%(m/V)，MgSO4·7H2O 0.5%(m/V)，pH7.5。

59.NZCYM培养基

酵母浸出粉（JS0685）0.5%(m/V)，酪蛋白氨基酸0.1%(m/V)，NZ胺1%(m/V)，NaCl 0.5%(m/V)，MgSO4·7H2O 0.2%(m/V)。

60.NZYM 培养基

除不含Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外，其他成分与NZCYM培养基相同。

61.NZM 培养基

除不含酵母浸出粉（JS0685）外，其他成分与NZYM培养基相同。

62. LB/Amp/X-gal/IPTG平板培养基

胰蛋白胨 1%(m/V)，酵母浸出粉 0.5%(m/V),NaCl 1%(m/V)，氨卡青霉素0.1 mg/ml,IPTG 0.5%(m/V)，X-gal 0.04 mg/ml,琼脂1.5%(m/V)。

1)称取胰蛋白胨（JS0688）10 g，酵母浸出粉（JS0685）5 g，NaCl（JS0060） 10 g，置于1 L烧杯中。加去离子水约800 ml，充分搅拌溶解。滴加5 mol/L NaOH溶液(约0.2 ml)，调节pH至7.0。用去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g琼脂。高温高压灭菌。

2)冷却至60℃左右，加入1 ml氨苄青霉素(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml)、2 ml X-gal (20 mg/ml)后均匀混合。

63.TB/Amp/X-gal/IPTG平板培养基

胰蛋白胨1.2%(m/V)，酵母浸出粉2.4%(m/V)，甘油0.4%(m/V)，KH₂PO4 17 mmol/L，K2HPO4 72 mmol/L，氨苄青霉素0.1 mg/ml，IPTG 0.024 mg/ml，X-gal 0.04 mg/ml，琼脂1.5%(m/V)。

1)配制磷酸盐缓冲液(0.17 mol/L KH₂PO4，0.72 mol/L K₂HPO4) 100 ml。

2)称取胰蛋白胨（JS0688）12 g，酵母浸出粉（JS0685）24 g，甘油4 ml，置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。去离子水定容至1 L后，加入15 g琼脂。高温高压灭菌。

3)冷却至60℃左右加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1 ml氨苄青霉素(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml)、2 ml X-gal(20 mg/ml)后均匀混合。