斑马鱼行为实验专题丨斑马鱼T迷宫行为学检测方法总结

生物科研实验室

近年来，斑马鱼作为新型模式动物已广泛应用于发育生物学、遗传学和行为学等领域。它在神经系统功能和形态发育方面被认为是优秀的模型，尤其在研究神经退行性疾病方面表现突出。由于斑马鱼基因同人类基因相似，其简单而能支配复杂活动的神经系统成为研究运动、学习和记忆等行为学评价的理想选择。
T迷宫行为范式程序
斑马鱼T迷宫由两块透明的丙烯酸玻璃板拼接而成，由长臂和断臂两个部分组成。其中长臂长、宽和高分别是40cm、10cm和10cm，短臂长、宽和高分别是20cm、10cm 和10 cm。在长臂的最前端设置一个边长为10cm正方形起点，由一个活动的挡板隔开。在短臂的两端分别设有红色和绿色的套筒。选择红色和绿色的套筒，是因为已有研究表明，斑马鱼成鱼有天然的颜色偏好，相比于绿色和橙色，其更偏向于红色，并且通过颜色形成与视觉感知有关的联想记忆。观察斑马鱼成鱼，确保T迷宫处于灯光照射的中心区域。周围用高于T迷宫的纸挡板围起来，以阻挡周围环境的光照对斑马鱼行为的影响。在绿色的短臂端设置营养富集（EC）区，通过记录斑马鱼进入EC区的第一次潜伏期以及在EC区停留的总时间来评估其学习记忆能力。整个斑马鱼T迷宫实验为期4天，实验期间水温恒定在28℃。

于建立模型后的 30、45、60d 进行学习记忆能力检测。

1、适应性训练: 在T迷宫中释放整组斑马鱼，让它们自由活动1小时，无需设置EC区。

2、实验前期准备: 在迷宫中注入斑马鱼养殖水，使短臂水位比其他位置高6厘米。将短臂两端用红色和绿色卡纸包裹，将左臂用绿色卡纸包裹并设为目标臂，底部铺满白色砂石，并添加人工绿植。

3、训练及测试流程：在每个训练及测试日的早上8:00，以相同时间点进行实验。将一条斑马鱼放置于通道起点，并观察记录其在6分钟内从起点到首次进入EC区的潜伏期。只有当鱼找到并在EC区内停留30秒后，才算成功进入EC区，并给予食物奖励。对于未能找到EC区的鱼，在6分钟后引导其进入EC区并停留30秒，同样给予食物奖励。每天的鱼都被分配一个独立编号的小鱼缸，完成测试后将其放回原组。每天进行一次训练，每次训练为6分钟，共进行4次训练，第5次为测试期。实验在夏季进行，确保T迷宫不受室内光源的影响，同时保持周围环境的宁静。
统计斑马鱼在T迷宫潜伏期和累计停留时间。