心肌梗死是一种严重的心血管疾病,由于冠状动脉血供急剧减少或中断,使心肌持续性缺血缺氧以致坏死,损害心功能且可能导至心律失常、休克以及心力衰竭等严重后果,已成为威胁人类生命健康的重大疾病之一。 目前建立心肌梗死动物模型的方法有多种,包括:冠脉结扎法、药物法、球囊堵闭法、栓塞法以及血栓形成法等。今天小助手根据粉丝们的后台留言,今天输出冠脉结扎法的实操步骤。 一、首先认识心脏的结构
冠状动脉结扎法操作简单、血管阻塞明确,比较符合心梗发生的病理过程,能较好的实现临床转化。 二、模型构建方法
1、术前准备: 实验小鼠术前禁食 12 h。将小鼠放进麻醉机的诱导箱,开启氧气调节气流量 (0.25 MPa,1 L/min),调整麻醉药([color=var(--weui-LINK)][url=]异氟烷[/url])浓度为 5%,约 1 min 完成小鼠诱导麻醉,之后调整麻醉药浓度至 2%,连接小鼠面罩并持续吸入。
2、手术操作: 小鼠仰卧位固定,左胸前手术区域剔除鼠毛并消毒。距胸骨左缘约1~2mm 皮肤处做长约1.5cm纵向切口,切口处行垂直外翻褥式缝合预留缝线。逐层[color=var(--weui-LINK)][url=]钝性分离[/url]胸壁肌肉,从第3或第4 肋间隙快速进入胸腔,用止血钳撑开肋间隙,配合心脏跳动左手轻轻挤压使心脏从孔隙中弹出。在左心耳下缘1~2mm、肺动脉圆锥旁 0.5mm处以8-0带线缝合针穿过冠状动脉前降支将其结扎,松紧适宜,控制进针深度(以隐约可见细针为宜)和行针宽度(2mm左右),当看到左心室前壁外表面变成苍白色时证明缺血成功。
由于不借助通气装置,要求开胸时间不要超过30s,结扎操作尽量控制在10s左右完成。结扎完成后轻柔地将心脏送回胸腔,挤压胸腔排出空气同时收紧结扎切口处预留缝线,完成手术。术中逐步调整麻药浓度至零,取下面罩后将小鼠置于恒温垫上约3~5 min 即可复苏。
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三、模型评价方法及结果分析
1、心电图判断:心肌梗死会导至心电图出现特定的异常波形,如 ST 段抬高、[color=var(--weui-LINK)][url=]T波倒置[/url]等。
2、超声检查心功能:在心肌梗死模型中,超声心动图通常显示心脏扩大、心肌变薄、心肌收缩功能下降等。
3、[color=var(--weui-LINK)][url=]TTC染色[/url]和病理染色。
4、心肌酶谱检测:肌红蛋白、肌钙蛋白及肌酸激酶同工酶。 四、技术要领
① 快:短时间内完成冠脉结扎术,尽快完成冠脉结扎并闭合胸壁,降低长时间暴露胸腔可能导至心律失常、气胸等致死风险。
② 准:冠脉结扎位置的选择至关重要,由于小鼠血管细小,侧枝循环丰富且走行不易观察,因此要求实验者操作精确,既要保证能够引起足够面积的心肌梗死,又要避免梗死面积过大而导至死亡,尽量在同一高度结扎形成较为一致的模型;
③ 稳:小鼠心室壁较薄,操作者需要严格控制穿刺深度,避免穿刺过深直接刺破室壁造成大出血。
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