干货分享 | ELISA成功与否在此一举

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ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析技术，可用于判断受检标本中是否含有待检测抗原或抗体，是免疫反应的定性和定量检测方法，也是许多科研人员的日常实验之一。这么重要的实验，每个步骤可都不能疏忽，其中最最最关键的一步，也是整个实验的最后一步，便是我们今天要介绍的——酶标仪的分析。
酶标仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器，它又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动两大类，但其工作原理基本上都是一致的,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的最终体积在250 μL以下。

原理


酶标仪的主要操作是使用光电比色计或分光光度计，测量光通过测试样品前后的能量差。测试物质吸收引起的光能差通常与测试物质的浓度线性相关。



酶标仪的波长范围通常为400 nm至750 nm，并受滤光片或衍射光栅（纳米）限制。光学系统中通过光纤为含有样品的微孔板孔提供光。穿过样品的光束直径范围为1至3毫米，样品发出的光由检测装置检测，检测装置放大信号并计算样品的吸光度。

分类


根据酶标仪的工作原理，我们可以将其进行分类。
颜色反应型酶标仪

通过酶催化底物的颜色反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。


荧光反应型酶标仪

通过酶催化底物的荧光反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。


ELISA酶标仪

专门用于执行ELISA，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。


发光反应型酶标仪

通过酶催化底物的发光反应来测量样品中的酶活性或待测物的浓度。


使用方法


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1
准备工作




a.确保酶标仪和所需的微孔板、试剂等干净，并进行校准和预热。

b.准备好所需的样品和试剂，并对其进行适当的稀释或预处理。

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2
设置酶标仪




a.打开酶标仪，进行初始化设置。

b.设置所需的波长或滤光片，选择适当的检测光源和检测范围。

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3
准备样品和试剂




a.准备样品和控制组，并将其分配到微孔板中的相应孔位。

b.添加适当的试剂，如底物、底物溶剂、酶标记试剂等。

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4
测量




a.将装有样品和试剂的微孔板放入酶标仪的样品架中，并确保对齐。

b.选择所需的测量时间和测量模式（吸光度、荧光或发光）。

c.启动测量程序，等待测量完成。

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5
数据分析




a.使用酶标仪提供的软件或其他数据处理工具进行数据分析。

b.对于吸光度测量，选择适当的标准曲线，将吸光度值转换为待测物的浓度。

c.对于荧光或发光测量，选择适当的标准曲线，将测量值与标准曲线进行比较或计算。

注意事项


酶标仪的功能是用来读取ELISA试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造成较大误差。下面是一些使用酶标仪时需要注意的地方：



使用加液器加液，加液头不能混用。



洗板要洗干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。



在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。



请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手。



如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害。



如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。



不要在测量过程中关闭电源。



对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。



使用后盖好防尘罩。



出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。