抗体亲和力成熟常用技术及服务流程

xiaoqin

欲实现抗体在体内达到一定的治疗效果，抗体的亲和力须达到一定的水平。然而，在很多情况下，想同时获得既具有良好的生物活性又具有高亲和力的抗体并不是一件容易的事。在这种情况下，提高已有抗体与抗原的亲和力便是药物研发最佳的选择。另外，经过人源化改造后的抗体的亲和力一般会下降，因此，将人源化抗体的亲和力回复到人源化改造之前或更高的水平是非常有必要的，亲和力成熟技术便是常常被用来提高抗体与抗原亲和力的技术。义翘神州提供的抗体亲和力成熟服务能够将抗体的亲和力提高到一个理想水平。

常用的抗体体外亲和力成熟技术

根据体内抗体亲和力成熟原理，在体外抗体亲和力成熟过程中，选择突变区域以及如何引入突变是一个关键问题，目前的突变策略主要分为三大类，随机突变、置换和定向突变。

①易错PCR

易错PCR是目前最常用的抗体突变技术，可以在抗体基因的全长或部分区域随机引入突变。在聚合酶对目的基因扩增时，通过应用错配率高的聚合酶或调整反应条件等，以一定的频率向目的基因中随机引入突变，并通过多轮PCR反复进行随机诱变，累计突变效应，最终获得目的蛋白的随机突变体。

②链置换

链置换是保留某个特定抗体的重链或轻链，另一条链与一个随机化的互补链进行组合，从中筛选更高活性的突变株。通过固定抗体两条链中的一条链，对另一条链构建具有足够多样性的置换文库，随机组合有可能产生最佳链组合，经过噬菌体抗体库筛选可获得高亲和力的新抗体。链置换策略常采用轻链替换。

③定点突变

由于天然抗体在亲和力成熟过程中，体细胞高频突变发生区域并非均匀分布，而是主要集中在与抗原直接接触的CDR区。在抗体的亲和力体外成熟过程中，CDR区是最常选用的定点突变区域，这样既可以获得足够的序列多样性，又不会破坏蛋白质结构。对CDR进行定点突变时，可以对多个CDR进行平行突变或进行逐步优化。

DNA改组

DNA改组技术是对同源的抗体基因，采用脱氧核糖核酸酶Ⅰ将其切割成不超过50bp的片段，再随机组合后进行PCR扩增成完成的抗体基因的技术。它包含了抗体片段随机化切割、重组和筛选的过程，一定程度上模拟了天然抗体的亲和力成熟过程，并加快了体外定向进化速度。

义翘神州——抗体亲和力成熟服务的流程

• 抗体序列分析及突变文库设计

• 丙氨酸突变载体构建

• 抗体筛选及亲和力鉴定

• 随机文库构建及筛选

• 抗体瞬转表达及纯化

• QC分析

周期：15-21周

交付内容：

• 1-3个经亲和力优化的抗体序列，每个1-2mg纯化抗体

• COA（含纯化抗体UV、SDS-PAGE及亲和力分析等结果）

义翘神州——抗体亲和力成熟服务优势

①丰富的经验及多例成功案例

②专业的抗体数据库分析系统

③计算机建模结构模拟优化

④随机突变、定点突变技术

⑤快速、高通量哺乳动物细胞抗体表达与筛选技术平台

⑥OCTET Affinity, Kinetics, off-rate, ranking

更多抗体亲和力成熟服务详情可以参看https://cn.sinobiological.com/services/antibody-affinity-maturation-service