抗体标记的方法及注意事项有哪些？

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什么是抗体结合？抗体结合也被称为抗体标记，是一种可将特定标记物共价连接到抗体分子上的抗体修饰技术。这些标记抗体可用于从细胞，组织，或者整个个体的混合物中分离和纯化的目的蛋白。

辣根过氧化酶（HRP）是最常见的抗体酶标记类型。HRP上仅有6个赖氨酸，而且它们的修饰并没有较多的影响酶活性。常见的荧光染料有FITC、PE、APC和PerCP等，均可用于标记抗体。

除了为客户提供抗体开发，义翘神州还可以提供抗体标记服务，可提供的标记物包括HRP、生物素、荧光基团等。

标记方法：

（1）标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是BNHS；对于偏酸性的抗原，标记时多采用BHZ；

（2）标记酶：以生物素标记HRP为例。

标记注意事项：

1. 待标记物的蛋白浓度不能过低，如若浓度过低需经超滤浓缩等手段提高浓度至0.1mg/mL以上。

2. 一个蛋白质可能被多个生物素标记，标记时，生物素与待标记物应有合适的比例，确保标记后不影响待标记物的活性。推荐生物素：抗原蛋白比例为1~3：1，生物素：抗体比例为5~20：1或根据标记试剂盒说明书推荐比例。

3. 为减少空间位阻影响，基于检测灵敏度特异性等要求，可在生物素与被标记物之间加入交联臂结构。

4. 如果偶联基团为氨基，待标记物的系统不得含有游离的氨基（Tris,氨基酸）、载体蛋白（BSA）或者其他干扰物，若有干扰物需要用标记缓冲液反复超滤确保其去除干净，若采用其他基团偶联试剂，待标记物系统亦不能有含对应的游离基团的物质。

5. 如果待标记物为分子量较小的物质，在纯化过程中注意超滤管、脱盐柱、透析袋的截留分子量。

6. 标记反应后的体积量至少在100μL以上，以达到纯化时的最小上样量。

7. 标记反应完成后（氨基偶联体系），可在体系中加入适量的含游离含氨基小分子物质，中和游离的生物素活化试剂，提高纯化效率，减少后续反应的假阳性和高背景。

8. 纯化后的标记蛋白可采用A280或BCA法测定蛋白含量。

9. 标记纯化后的蛋白可根据蛋白性质进行分装长期保存，减少冻融次数。

更多抗体标记详情可以参考：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation