实验干货 | 常用分子生物学技术原理

科研实验

1. 分子杂交与印迹技术

（1）探针是经过特殊标记，能与待测单链核酸分子互补结合的已知核酸片段

（2）印迹是将电泳分离后的大分子转印到[color=var(--weui-LINK)][url=]硝酸纤维素膜[/url]上，以便杂交的技术

（3）DNA印迹：Southern blotting，用于检测基因组DNA

（4）RNA印迹：Northern blotting，主要用来检测mRNA的表达水平

（5）蛋白质印迹：Western blotting，用于检测蛋白质的水平

2. PCR技术

（1）反应体系：单链DNA模板、特异性DNA引物、耐热[color=var(--weui-LINK)][url=]DNA聚合酶[/url]（Taq DNA聚合酶）、dNTPs底物、含Mg2+的缓冲液。

（2）反应步骤：变性、复性、延伸

（3）[color=var(--weui-LINK)][url=]逆转录PCR[/url]：即RT-PCR，在PCR之前先将单链mRNA逆转录成cDNA。这是目前从RNA水平出发研究基因表达或获得目的基因最有效的方法。

（4）应用：目的基因的克隆、基因的体外突变、微量DNA或RNA扩增、DNA序列测定、基因突变分析

3. 蛋白质相互作用研究

[color=var(--weui-LINK)][url=]酵母双杂交[/url]技术、CoIP

4. DNA-蛋白质相互作用

电泳迁移率变动分析（EMSA）、染色质免疫沉淀技术（ChIP）

5. 基因敲除

即gene knock-out，通过同源[color=var(--weui-LINK)][url=]基因重组[/url]原理使得某个基因活性丧失，从而研究该基因功能的方法