细胞培养常见七大误区

无锡耐思NEST

细胞培养过程中时常会出现这样或那样的问题,别小看细胞培养,里面却蕴含着大学问.通过与使用者沟通你会发现了很多可以避免的问题发生,下面对细胞培养过程中存在的几大误区做详细解析。
误区一XX实验室培养XX细胞用的就是这个培养基，我用一样的就可以

•选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：

首选：建立该细胞株所用的培养基

参考：文献

尝试：实验室常用的培养基

按需：根据细胞株的特点、实验的需要来选择

最客观：用多种培养基培养，根据实际效果选择，但较繁琐

误区二长期使用抗生素，以对抗污染

• 细胞培养时不应常规使用抗生素

• 连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导至轻度污染持续存在，一旦将抗生素从培养基中去除，这种轻度污染最终将发展成大规模污染

• 连续使用抗生素会掩盖支原体感染及其他隐性污染

• 有些抗生素会与细胞发生交叉反应，干扰您研究的细胞过程

误区三培养基中的谷氨酰胺容易降解，需要不断补充

如果正确使用，一般不需要补加

• 4℃避光保存

• 分装，不要反复预热

• 含有谷氨酰胺的培养基，开封后应尽快用完

误区四培养基误存于-20℃,溶解后继续使用

• 在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基再次融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导至培养基营养成分和渗透压改变，培养细胞时，容易细胞破裂而死亡

• 建议丢弃该培养基,重新购买新的培养基用于细胞培养

误区五常见细胞系无需检测血清批次，可以直接切换

• 血清来源于动物，组成成分有1000种左右，每个批号的组分和组分含量都是不确定的，批间差异是可能存在的

• 如果某一个批次血清使用效果较好，记住批号，订货的时候给予说明

• 如果需要换不同批号的血清，提前查询COA文件，寻找测试结果接近的批次

• 先订购一瓶试用，试用成功之后再大量订购该批号血清

误区六血清灭活以后使用效果更好

• 血热灭活的血清对大多数细胞而言是不需要的，高温处理可能影响了血清的品质，造成细胞生长速率的降低，经过热处理的血清，沉淀物增多

• 灭活补体系统

补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞，刺激平滑肌收缩等
• 在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清
血清必须热灭活？
热灭活是指将血清于56℃处理30分钟，灭活血清中的补体。
实验表明，经热灭活的血清对细胞生长可能仅有微小促进或完全没有任何作用，甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养成分，从而影响血清质量，造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长，都会造成血清品质下降。且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀概率，这些沉淀物在倒置显微镜下观察像是“小黑点”，通常会让研究者误以为是血清遭受污染。
因此，若非必须血清不需要做热灭活，而少数对补体敏感的细胞实验，如某些免疫学实验或腺病毒包装等，可酌情对血清进行热灭活操作。
热灭活方法示例：
1.热灭活前须先摇匀解冻后的血清并恢复至室温；
2.取部分摇匀血清置于50ml离心管中，并准备同规格对照管一个；
3.对照管内加入血清等体积水；
4.对照管内插入温度计进行温度预试，当温度达到56℃时将恢复至室温的血清放入水浴锅30min；
5.灭活过程中需要每隔5min轻轻晃动摇匀，以保证温度均一。

误区七原代细胞的培养及操作与传代细胞一样

• 与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。

• 当细胞传代时，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

• 通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导至功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导至细胞死亡或损伤。

• 原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。

• 我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。