23年3月23日实验记录-三叉神经痛模型构建

与光同辉

三叉神经痛(trigeminal neuralgia，TN)是累及面部三叉神经感觉分布区的反复发作的阵发性剧烈疼痛，严重影响患者的生存质量。由于TN病理生理机制不明确，临床治疗存在挑战。

因此，建立可靠的模拟临床TN疼痛症状的模型是研究TN的关键。


一
脑闩蛛网膜下隙注射模型

01
青霉素 G-K
造模方法：

用针头在大鼠枕骨和第一颈椎之间的闩上部、闩左下方约2mm处和闩左下方4～5mm处的硬脑膜上各扎一小孔，分别插入一根自制塑料套管(带管芯) 至孔内，固定并缝合; 术后3d，经微量注射器将10μL 3 ×108U/L青霉素G-K溶液注入蛛网膜下腔; 在闩左下方约2mm处注射药液的大鼠出现”扳机点“样疼痛行为持续数十秒。

用途：

该动物模型仅能模拟TN样急性痛反应，当致痛物质随脑脊液代谢降解后，痛样反应基本消失。因此，该模型方法不能模拟TN慢性痛和自发性痛的特征。


02
马钱子碱
造模方法：

大鼠麻醉后，弯曲大鼠颈部使其小脑延髓池入口扩大至最大限度，并覆以黏土模化固定; 使用一支 26号针头10μL微量注射精度的注射器插入枕骨大孔下缘与寰椎之间的皮肤至 4mm深度，旋转针头并向上推进以保证针头的全部弯曲段能紧贴枕骨部的内面；注射5μL 200μmol/L的马钱子碱溶液至小脑延髓池；注射马钱子碱溶液后，大鼠出现显著口面部搔抓理毛等痛行为20多分钟，没有行为异常和惊厥；当注射卡马西平和马钱子碱混合溶液时，疼痛评分明显减少。

用途：

该模型也仅能模拟TN样急性痛反应，与青霉素G-K模型相似。


二
三叉神经末梢致痛模型

01
角叉菜胶
造模方法：

大鼠经皮下注射角叉菜胶(150μL生理盐水中加入6mg角叉菜胶) 至右侧面部，术后出现不对称的面部痛行为学改变。

优缺点和用途：

虽然该建模方法简易，但也仅模拟口面部炎性痛特征，故只适用于炎症导至TN方面的研究。


02
福尔马林
造模方法：

弹丸式注射 40μL 2.5%福尔马林溶液至大鼠右上唇近鼻侧部，产生颌面部炎症反应，目的是诱导TN样疼痛；在注射完福尔马林溶液后的0～3min和12～30min 的时间段内，大鼠搔抓和退缩行为增多，且发现A类肉毒素能抑制该疼痛反应。

用途：

该模型也仅适用于炎症导至TN方面的研究，与角叉菜胶模型相似。


03
牙髓缓激肽注射模型
造模方法：

在大鼠任意一个下切牙的基部钻出一个大约1mm2大小的孔洞，暴露牙髓，在操作过程中避免损伤牙髓; 将一根横截面约0.35mm2针头弯成L形，从而使针头远端伸至洞口，其近端与一根长10～20cm、截面0.6mm2的聚乙烯管相接，这样形成一套药液输送复合管道；借助微量注射器，经复合管道向牙髓腔内注射1.25×10-3g/L缓激肽溶液，诱导大鼠口面部痛性反应；术后大鼠咬合反应增多，经管道输注5.0～30.0 mg/kg卡马西平至牙髓，能使咬合反应减少。

用途：

建立该模型的原理是缓激肽作用于牙髓，诱发TN样疼痛反应，仅适用于牙髓疼痛导至TN方面的研究。


04
眶下神经慢性缩窄环模型
造模方法：

眶下神经慢性缩窄环模型有经口腔、经口外鼻旁、经眉弓上三种手术入路暴露眶下神经，用铬制缝合线疏松环扎眶下神经，对神经产生类似于微血管的压迫作用，引起神经的小部分变性坏死和类似于TN的脱髓鞘 病 变，术后实验组大鼠出现口面部痛觉超敏现象。

用途：

该模型在理论上符合微血管压迫，是目前被广泛应用的TN动物模型。

注意：

但在实际手术操作中，结扎眶下神经的松紧度不易控制，临床上仅是轻微的血管压迫，若结扎过紧将偏离临床实际，甚至引起整条神经的缺血坏死; 反之，结扎过松又不能发挥压迫神经的作用。此外，铬线在生理、生化等方面与微血管有本质上的不同，还有潜在的毒性作用，故在压迫材料方面尚需改进。


05
眼镜蛇毒眶下神经注射模型
造模方法：

在大鼠眉弓上缘切开约1cm小口，暴露眼眶和鼻骨; 用玻璃棒将眶内容物推向一侧，并仔细将眶下神经与周围组织完全游离，再用玻璃神经解剖器轻轻提起该神经; 台湾眼镜蛇毒(每4微升生理盐水含有0.4mg冰冻蛇毒) 被注射进眶下神经鞘内，在注射处周围绕以无菌棉，防止蛇毒溢出；术后3d，大鼠出现同侧口面部机械触摸痛并持续60d；大鼠对侧口面部眶下神经感觉分布区基础痛阈数值显著减少，但仅持续30d左右。


06
部分眶下神经切断模型
造模方法：

大鼠右上颌颊侧牙龈做一切口，暴露眶下神经并彻底分离周围组织; 从上颌骨提起眶下神经，剪断该神经的外侧1/2，建立部分眶下神经切断模型; 反映大鼠双侧口面部机械触摸痛的退缩阈值降低直至术后28d，而且在假手术组未被观察到；术后7d，普瑞巴林显著抑制了模型大鼠退缩阈值的减低。


07
三叉神经根立体定位注射模型
造模方法：

大鼠在立体定位仪的引导下(坐标是前囟后7.2mm，中线侧部2.4mm 和颅骨下2.4mm) ，植入一根引导插管至三叉神经根，取一不锈钢针经引导插管末端再伸出1mm，从而将4%琼脂溶液注入三叉神经根背面，进而达到压迫三叉神经根的目的；术后脑组织受损伤大鼠出现口面部机械触痛、痛觉超敏等持续行为学改变和三叉神经根轴突的髓鞘脱失；在插管植入过程中，不可避免导至大鼠脑组织的部分损伤，但是脑组织受损伤与脑组织未受损伤的大鼠相比在行为学上无任何不同，说明插管植入导至的脑损害不对实验结果造成影响。



结论
TN动物模型种类颇多，均有各自的优势和局限性。在临床中，TN发病率女性几乎是男性的2倍，说明性别可能是TN发病的重要影响因素。但到目前为止，在TN发病机制的实验研究中，几乎使用的都是雄性动物模型。相信随着TN动物模型研究的进展，TN相关机制的研究也将有更进一步的深入。