K02-RPT重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书（96T）

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重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书（96T）


1.试剂盒用途
本试剂盒用于体外定量检测待测样品中重组胰蛋白酶含量。
本试剂盒仅供研究和工业生产使用。
2.试剂盒基本参数
灵敏度：≤ 1 ng/ml

特异性：可检测重组胰蛋白酶，与其它重组大肠菌表达系统
相关蛋白无明显交叉反应。
重复性：板内，板间变异系数均 < 10%。
工作时间：熟练实验人员可在 2.5 小时内完成一次测定。
有效期：6 个月
3.试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在 2-8℃保存一周。如果一周以后才使用
试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。


说明:
1、所有试剂瓶须旋紧瓶盖以防止蒸发和微生物污染。
2、酶标板-20℃可存放 6 个月，2-8℃存放勿超过一周。
上海雅心生物技术有限公司 K02-RPT
4.试验所需自备物品
1. 酶标仪（滤光片主波长 450 nm，参考波长 650nm）
2. 高精度移液器，EP 管及一次性吸头、一次性加样槽
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4. 洁净无纸屑的吸水纸或干布

5.待测样品注意事项
1.样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于 2-8℃，若不
能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1 个月
内检测），或 -80℃（3 个月内检测），避免反复冻融。
2.试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果样品中检
测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数
稀释后再测。
3.若使用化学裂解液制备的样本或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导至 ELISA 测值出现偏差。
6.检测前准备工作
①请提前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒平衡至室温，
观察溶液是否有结晶，如果有结晶按提示进行操
作。提前 15 分钟打开酶标仪预热。
②稀释液配制
将浓缩标准品&样品稀释液&HRP-抗体稀释液用双蒸水稀
释（1：25）。
③洗涤液配制
将浓缩洗涤液用双蒸水稀释（1：25）。
提示：从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常
现象，可用 40℃水浴加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液
（加热温度不要超过 50℃，使用时洗涤液温度应为室温）。
请当日使用。
④标准品配制
将标准品于 1000 转/分离心 1 分钟后，加入标准品&样品稀
释液 1.0 mL 至冻干标准品中，旋紧管盖，静置 10 分钟后上
下温和颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀
（浓度为 10 ng/mL）, 然后进行倍比稀释（注：不要直接在
反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、 5、

2.5、 1.25、 0.63、0.312、0.156、0 ng/mL。标
准品&样品稀释液直接作为空白孔 0 ng/mL。
提示：溶解和稀释标准品过程中尽量避免产生气泡。
倍比稀释方法
取 7 只 EP 管，每管加入 500 μL 标准品&样品稀释液，从
10 ng/mL 的标准品工作液中吸取 500 μL 加入含有 500 μL
标准品&样品稀释液的 EP 管中混匀配成 5 ng/mL 的标准品
工作液，按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。
标准品稀释图例（以 500 μL 为例）
提示：最后一管直接作为空白孔，不再加入标准品工作液。
⑤HRP 标记抗体工作液配制
实验前请先将抗体管 1000 转/分离心 1 分钟，以避
免管壁及管盖上残留抗体。计算实验所需抗体用量（以
100 μL /孔计算），实际配制时应多配制 100-200 μL 工作液。
使用前
15 分钟，用抗体稀释液将 HRP-标记抗体稀释为工作浓度（抗体：稀释液 = 1：250），当日使用。
⑥显色底物（TMB）工作液配制
计算实验所需显色底物用量（以 100 μL /孔计算），实际配
制时应多配制 100-200 μL 显色底物工作液。使用前 15 分钟，
用底物稀释液将 TMB 显色底物稀释为工作浓度（底物：稀
释液 =1：20），避光保存，当日使用。
提示：配制显色底物（TMB）工作液要严格避免污染，如
出现变蓝的现象应重新配制。