核酸检测病毒具体步骤和优缺点介绍

小书虫

核酸检测是指病毒DNA和RNA的检测，在临床上主要用于乙肝、丙肝和艾滋病以及其它病毒的检测。

通过核酸检测，可以检测血液中是否存在病毒核酸，以诊断机体有无病原体感染，将乙肝、丙肝和艾滋病等病毒的检测窗口期缩短，从而提高诊断和治愈率。

一、核酸检测具体举例介绍

HIV基因组由两条单链RNA组成，每个RNA基因组约为9.7k，在RNA5′端有一帽结构（m7G5ppp5′GmpNp），3′端有poly（A）尾巴。HIV的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同，均由5′末端长重复（long terminal repeat，LTR）、结构蛋白编码区（gag）、蛋白酶编码区（pro）、具有多种酶活性的蛋白编码区（pol）、外膜蛋白（env）和3′末端的长重复LTR区组成。

1，核酸提取均采用磁珠法

1）磁珠提取的原理：

将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸，并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。

2）步骤：

裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱

3）优点：

a.磁珠提取特异性高，受标本因素影响小，灵敏度高

b.易于实现自动化

4）缺点：

a.成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动)。

b.完全手工工作，工作量太大。

2、核酸快速释放技术

DNA释放剂

本次介绍苏州先达基因的DNA释放试剂盒，专用于从各种常见的样品中快速释放恒温荧光扩增的 DNA，具有以下特点：

1. 核酸释放剂可以快速裂解样品，使样品的 DNA 游离在溶液中。无需自备任何试剂，不使用苯酚、氯仿等有毒试剂。

2. 操作简单，只用一步（约 3min）即可得到用于恒温荧光扩增的 DNA 模板，不需要任何离心、抽提等操作步骤。

3. 全过程仅在一个离心管内完成，避免微量样品的损失，且不容易交叉污染，比常用的抽提试剂盒简单，方便。

4. 兼容性广，适用于常见的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、各种动物组织、口腔细胞、毛发、组织中的细菌和病毒等。

应用领域：

生命科学研究、分子诊断、动物疫情检测、食品安全检测、疾控/突发传染病检测、精准用药基因检测

RNA快速提取试剂盒

本试剂盒是先达基因为匹配现有的ERA等温扩增技术，着力为实现分子诊断POCT化而自主开发的一款核酸快速提取产品。本产品可在5min之内快速完成对组织、血液、拭子、细胞等不同少量以及微量样品中病毒的RNA提取和纯化。利用本产品提取获得的RNA可直接应用于核酸扩增及检测、体外逆转录、基因克隆、文库构建、杂交等多种生物学实验及研究。

特点：

5分钟内即可快速提取和纯化得到高品质的RNA；

样本要求量低，RNA提取产量可达到25ug；

操作简便，只需5个操作步骤；

不含酚/氯仿等有毒有害试剂。

3，应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测技术

根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction，nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增，其产物再经内侧引物扩增，直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100～1000倍，可检测到0.5fg质粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。

根据专业文献记载，用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性，而61名健康人和可疑者均为阴性，后者经追踪检测抗体排除了HIV-1感染。

由此可知，nPCR是一种敏感性极高、特异性很强、操作简便易行的HIV-1基因检测技术。它已经在早期诊断和外周血病毒含量检测中发挥了重要作用，而且有着更广阔的应用前景。

二、核酸检测的优点

人体感染艾滋病病毒后，一般需要2-12周，平均42天左右血液中才可检测到HIV抗体。在这段时期内，常规检测技术根本无法检测出HIV病毒，这就是常说的“HIV窗口期”。“窗口期”的存在，也解释了为什么一些病人在接受了正规医院输血后却感染艾滋病的原因。

在感染过程中，首先出现的是病毒RNA，这时可以用PCR的方法检测出来，之后出现的是IgM抗体，使用双抗原夹心法即可以检测出来，然后出现的是IgG抗体，使用间接法可以检测出来。

省市疾病控制中心和检测试纸，使用的检测方法都是检测抗体抗原，无法避免“HIV窗口期”因素的干扰。所以说，常规检测技术在HIV窗口期内存在重大缺陷。

三、核酸检测意义

有些人认为艾滋病既然无法治愈，查出来也没用，不愿进行核酸检测。实际上，早期诊断、早期治疗不仅有利于延缓病情发展，提高生活质量，还可及时保护他人免受感染，有利于艾滋病的控制。

1、解决艾滋病病毒感染的“窗口期”问题

原来的HIV免疫学检测方法都存在一定的窗口期。艾滋病病毒在进入人体后，机体需要经过一段时间才会产生抗体，在此期间血液抗体检测呈阴性，抗原抗体通常是在感染后3—6周后才能被检测出来，时间上较久，而且在准确度上会大打折扣。在窗口期虽测不到HIV抗体，但体内已有HIV，因此窗口期同样具有传染性。

在血液筛查方面，艾滋病病毒核酸检测无疑可以增加血液的安全性。国家相关法律规定，由窗口期血源引起的感染不属于医疗事故。原来的免疫学检测方法都存在一定的窗口期，这样给血液安全带来很大的威胁。在EIA试剂检测后，美国几种主要经血传播病毒的“窗口期”分别为：HIV 22天，HTLV 51天，HCV 72天，HBV 63天；输血后病毒危险性分别为1:493 000，1:641 000，1:103 000和1:63 000。在美国，艾滋病病毒核酸检测已经常规用于HIV 和HCV筛查。这样做大大降低了输血后感染HIV病毒的残余危险性。

2、及早发现，早期药物预防，降低感染几率

进行HIV病毒核酸检测，能及早发现感染，在HIV病毒入侵两周内，及时注射丙种球蛋白抑制HIV，可以降低被感染的几率。

艾滋病病毒是逆转录病毒，所谓逆转录病毒是它在侵入宿主细胞后，以自己的单链RNA为模板，按照碱基互补配对原则，在逆转录酶的作用下，合成cDNA，新合成的cDNA插入宿主的核DNA中，随宿主DNA复制、转录、翻译达到扩增目的病毒。丙种球蛋白是逆转录抑制剂，就是阻止HIV逆转录宿主DNA过程的药物。及时发现，尽早治疗，能降低被感染的几率，也能增强机体对HIV 的特异性细胞和体液免疫应答，缩短潜伏感染的半衰期，维持CD4+ 细胞的功能，减缓艾滋病的病程进展。

美国《时代》杂志网站近日发布了“2011年十大医学突破”评选结果。其中有一项即为“艾滋病防治的新进展”。新研究发现，抗逆转录病毒（ARV）药物不仅帮助艾滋病患者抗击HIV，还能让健康人远离艾滋病毒。美国华盛顿大学一项涉及4758名参试者的研究发现，服用该药的健康者HIV感染率降低73%。

3、快速排查感染隐患，解除恐艾心理压力

近年来，随着艾滋病的迅猛发展，有许许多多的人患上了这种艾滋病恐惧症。恐惧，是人类的一种本能的反应，适度的恐惧对人类的生存是有利的，但不必要的、过分的恐惧却是有害的，是一种心理异常。

艾滋病恐惧症就是这样一种心理异常，它包括以下情形：不必要地过分担心自己会得艾滋病，或者毫无根据地怀疑自己感染了艾滋病，患者同时伴有一些情绪异常和行为异常，严重影响其学习、工作、生活及社会交往。