时间分辨荧光免疫分析方法学评价

萝卜涨价了

(thyroidstimulatinghormone,TSH)是判断甲状腺功能和下丘脑2垂体2甲状腺轴功能的指标之一,尤其是甲状腺功能低下的诊断、血清TSH的测定有重要意义[1]。本文以血清TSH分析为例,测定各内质控参数和方法学参数,从方法学的角度客观评价时间分辨荧光免疫分析方法。

1材料与方法1.1仪器与试剂

1235AutoDelfia时间分辨荧光免疫分析系统由PerkinElmerWallac公司生产;TSH试剂药盒由PerkinElmer公司提供。

1.2质控标本

Blank“0”血清为我科收集的甲亢病人混合血清,纳入标准为TSH<0.005μU/mL。内质控血清为我科收集的混合病人血清,分为低、中、高3种,纳入标准以四碘甲状腺原氨酸(TT4)的浓度值为依据,分类如下:低质控(TT4<50nmol/L)、中质控(TT4在80～170nmol/L范围内)、高质控(TT4>180nmol/L)。质控血清制备,采用少量封装和-20冷冻保存的方法。正常血清为我科收集的混合血清,纳入标准为TSH在0.9～4.5μU/mL范围内。标准品由TSH药盒提供。

1.3病人标本经放射免疫分析(RIA)甲状腺激素5项(TT3、TT4、TSH、FT3、FT4)综合测定,并结合临床症状表现,确诊为甲亢的病人56位,排除为甲亢的病人15位;确诊为甲低的病人37位,排除为甲低的病人22位。

1.4灵敏度测试

用Blank“0”血清对TSH标准品(0.03μU/mL)进行稀释,稀释梯度为12、14、18、116、132,制成5个待测样品进行TSH实验。

1.5精密度测试

用低、中、高质控血清分别进行批内和批间精密度测试,重复次数为20,并对测定结果和Slope、ED20、ED50、ED80等4项指标进行统计。

1.6准确度测试

在正常血清内分别加入低、中、高标准品,制成3个待测样品,进行回收实验。

1.7平行性实验用低质控血清制备有浓度梯度的血清,稀释比例为12、14、18、116、132,制成6个待测样品,进行TSH实验。

1.8诊断实验将“金标准”确诊为甲亢的56份血清标本和排除为甲亢的15份血清标本组成一个标本总数为71个的待测组,用1235AutoDelfia进行TSH测定。计算各对应阈值的敏感度和特异度。描绘ROC曲线(受试者特性曲线),通过ROC曲线确定甲亢诊断的最佳阈值。在四格表内,利用选定阈值,对照“金标准”,计算时间分辨荧光免疫分析法TSH甲亢诊断的真阳性、假阳性、真阴性和假阴性个数。并计算用TSH诊断甲亢的敏感度、特异度和准确度。将“金标准”确诊为甲低的37份血清标本和排除为甲低的22份血清标本组成一个标本总数为59个的待测组,用1235AutoDelfia进行TSH测定。计算各对应阈值的敏感度和特异度。描绘ROC曲线(受试者特性曲线),通过ROC曲线确定甲低诊断的最佳阈值。在四格表内,利用选定阈值,对照“金标准”,计算时间分辨荧光免疫分析法TSH甲低诊断的真阳性、假阳性、真阴性和假阴性个数。并计算用TSH诊断甲低的敏感度、特异度和准确度。

2结果与讨论

2.1灵敏度结果如表1所示。TSH药盒使用说明书提示TSH的最小测定值小于0.005μU/mL[2],有关文献报道也与之相符[3]。本文实测结果显示,时间分辨荧光免疫分析系统TSH的最小测定值为0.002μU/mL,这证明了上述报道结论。

2.2精密度测试结果精密度测试结果如表2所示,批间稳定性测试结果如表3所示。

时间分辨荧光免疫分析技术,具有灵敏度高,重复性好,标准曲线动态范围宽,标记物存储时间长等优点[4],同时由于时间分辨荧光免疫分析系统采用波长分辨、时间分辨和1000次均值等方法,提高了系统的探测灵敏度和探测特异性,真正实现了零本底测量[5],从而大大减少了系统的随机误差,有效地提高了探测精度[6,7]。本文结果表明,低、中、高3种质控样品批内和批间变异系数均小于5%,批间稳定性参数各变异系数也均小于5%,与统计学要求相一致,且符合标准曲线质控参数的重现性,提示系统精度较高。

2.3准确度测试结果回收试验测试系统准确度的结果如表4所示。回收试验结果表明,回收试验满足临床要求,符合检验统计结果,与有关报道相符[7],提示系统测试准确度较高。理论值与实测值间作回归分析,结果表明相关系数r=0.999,回归方程表现出良好的线性,且与标准曲线相平行,成正比关系,与有关报道相符[8],提示系统有效性良好。

2.5诊断实验结果

2.5.1甲亢诊断实验:TSH血清时间分辨荧光免疫分析诊断甲亢的试验结果,如表6所示。

由表6可知,血清TSH浓度为0.3μU/mL处(3标记处),敏感度和特异度之和为最大,提示该值为TSH血清时间分辨荧光免疫分析诊断甲亢的最佳阈值(cutoffpoint)。计算该阈值甲亢诊断的敏感度、特异度、准确度和阳性似然比(LR+),结果提示该方法学血清TSH诊断甲亢,敏感性好,特异性强,准确度高(见表7)。

由表8可知,血清TSH浓度为5.0μU/mL处(#标记处),敏感度和特异度之和为最大,提示该值为TSH血清时间分辨荧光免疫分析诊断甲低的最佳阈值。计算该阈值甲低诊断的敏感度、特异度、准确度和阳性似然比,结果提示该方法学血清TSH诊断甲低,敏感性好,特异性强,准确度高(见表9)。

本研究结果显示,时间分辨荧光免疫分析方法学血清TSH诊断甲状腺疾病,具有高敏感性、高特异性和良好的准确度。综上所述,时间分辨荧光免疫分析方法是一种有效性好、准确度高、特异性强、灵敏度高、测试精度良好的非放射性免疫方法,可广泛应用于临床和科研工作。

体外诊断技术交流群：546848508