自建生化检测系统稳定校准品的建立

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国际上特别强调使用固定组合的检测系统(即分析仪器、校准品、试剂和检验程序等形成固定组合)，即原检测系统，使用这样的检测系统对患者标本进行检验，其检验结果可溯源至参考方法，具有溯源性和可比性…。所以面对国内实验室大量使用的自建检测系统(即实验室根据自己意愿选择仪器、试剂、校准品等而建立的检测系统)，如何实现其检验结果的溯源性和可比性是一个极大的现实问题。为了实现本科使用的自建系统“雅培C8000生化分析仪／上海科华试剂”检验结果具有长期稳定的溯源性，增加其与原检测系统的可比性，本文根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差评估EP一9A2指南文件》，利用量值传递和量值溯源的原理，分别于量值传递校正前后在自建检测系统和标准检测系统上作一系列的溯源比对。

1材料与方法1．1检测系统

1．1．1原检测系统由日立7600生化分析仪、罗氏试剂及测定程序、cfas校准品(批号为177809)及罗氏质控品(正常水平批号为172714，异常水平批号为178798)组成，因其是国际公认配套的原(标准)检测系统，具有量值溯源性，其检测值可溯源至参考方法，且参加卫生部、省、市室间质控成绩优秀，室内质控日间CV均小于1／3CLIA88室间评估允许误差，故将其作为目标检测系统(以下简称A系统)。

1．1．2自建检测系统雅培C8000生化分析仪、上海科华试剂及测定程序、cfas校准品(批号为181440)及罗氏质控品(正常水平批号为150407，异常水平批号为172719)(以下简称B系统)。

1．2样本

浓度选择按照EP一9A2文件中方法比对实验数据分布建议表的要求，并尽可能覆盖方法学检测线性范围，每次比对试验于不连续的5d、每天收集8份新鲜病人血清标本，共40份标本，并把每份标本平均分为二份(分别于两检测系统上检测)；另外取多份肉眼观察无黄疸、溶血、脂浊的病人新鲜血清混成一混合血清待用。

1．3检测方法

1．3．1准备工作两仪器各经常规维护、保养，并用各自校准品校准，两系统质控在控时方可进行以下实验。

1．3．2量值传递前比对试验各项目均采用连续监测法，均严格按厂商试剂盒的说明书进行，在不连续的5个工作日，每天选用8份新鲜病人血清分别用A系统、B系统作双份平行测定，即测定顺序为l一8、8—1，得40份数据，各检测系统在收到样本2h内完成检测。

1．3．3临时校准品制备A系统作常规维护、保养，再用cfas(批号为177809)校准品对各项目校准，然后把cfas(批号为177809)当作标本检测，不断适当调整K值，直至测得值等于cfas(批号为177809)标定值，然后多次(5次)重复测定一新鲜混合血清，取均值，并将其作为具有量值传递载体值的自建系统临时校准血清。

1．3．4自建系统的校正用上述1．3．3所得的临时校准血清对自建检测系统校准，再把自建系统的校准物cfas(批号为181440)当作病人标本在自建系统上对七项血清酶平行测定5次，取均值作为cfas(批号为181440)在自建系统上的实际校正值，并用此值重新校准自建系统。

1．3．5再次在两检测系统上就40份病人新鲜血清对各项目进行如1．3．2所述比对试验，记录结果。

1．4数据处理

1．4．1不采用已明确有人为误差的结果按EP一9A2文件进行方法内及方法间离群值检查，以4倍的平均差值为判断限，所有差值都不应超出限值。如果超出则为离群点，只有一个离群点可删除，一个以上则查明原因，并重新检测补充数据。

1．4．2目标系统(X)测定范围的检验将4|D份数据输入WindowsExcel软件，不同检测系统血清测定结果进行相关回归分析，并得出回归方程Y=aX+b和相关系数(r)，根据NC—CIS文件EP一9A2，如r≥0．975则说明x范围合适，直线回归统计的斜率和截距可靠，可以用它们去估计自建系统的系统误差；并以医学决定水平处的系统误差来判断自建系统量值溯源性如何，临床是否可接受；如r<0．975，则使用部分个别差异法计算平均偏差。

1．4．3方法间系统误差的计算及评价利用线性回归方程，以各项目医学决定水平处的浓度xc代人回归方程求得Yc，则Y与x的系统误差(SE)=IYe—Xcl，相对偏差(SE％)=IYc—XcI／Xc×100％。以美国CLIA88对室间评估的允许误差(Ea)的1／4为判断结果可接受的依据，即SE％≤1／4CLIA88时说明白建系统与目标检测系统间结果具可比性，自建系统具较好的量值溯源性，临床可接受。

2结果2．1进行方法内及方法间检查均未发现离群值

2．2量值传递前自建系统与目标系统测定结果的相关与回归分析，以目标检测系统为x，自建系统为Y，进行相关和回归分析，并且在不同医学决定水平处进行偏倚评估和临床可接受性能评价(表1)。

2．3经目标检测系统重复测定的混合血清各项目定值分别为(单位为u／L)：ALT(101)、AST(86)、ALP(175)、GGT(88)、CK(219)、LDH(240)、AMY(142)，用此混合血清作为临时校准物校准自建系统，然后把自建系统的校准物cfas(批号为18140)当作标本多次测定，其标示值与实测值比较见表2；用实测值再次校正自建系统，然后再次在两检测系统上就4O份病人新鲜血清对各项目进行比对试验，其回归分析及偏倚评估、临床可接受性见表3

3讨论

检测系统是指完成一个检验项目所涉及的仪器、试剂、校准品、检验程序、保养计划等的组合。。国际上特别强调使用固定组合的检测系统(分析仪器、校准品、试剂和检验程序等形成固定组合)，即标准检测系统，使用这样的检测系统对患者标本进行检验，其检验结果可溯源至参考方法，具有溯源性和可比性…。即在实际工作中，实验室使用固定组合的标准检测系统进行检验，其检验结果具有可溯源性，而改变分析系统中的任一因素，其检验结果的可溯源性将被打断。面对国内实验室大量使用的自建检测系统(即实验室根据自己意愿选择仪器、校准品、试剂等而建立的检测系统)，如何实现其检验结果的溯源性和可比性是一个极大的现实问题。

量值溯源是指自下而上通过不问断的校准而构成的溯源体系，使测量结果能够与有关的测量标准，通常是国际或国家测量标准联系起来的特性。在实际测量中，使用不同等级的标准物质，按照由低到高，逐渐进行量值的追溯，直到国际单位，这一过程叫做量值的“溯源过程”；相反，从国际基本单位用不同等级的标准物质由高到低进行量值传递，最终到实际测量现场的过程，被称为量值的“传递过程”。两个实验室的认可准则Is0／IEC17025“检测和校准实验室能力的通用要求”和ISO／FDIS15189“医学实验室质量和能力的专用要求”也都对临床检验结果的溯源性作出明确要求。本研究参照NCCLS文件EP一9A2，首先在自建检测系统和原检测系统上进行“自建校准品”量值传递前的比对试验和偏倚评估，计算出自建系统与标准系统的检测结果差异：由表1可知量值传递前自建系统与目标系统的相关性良好，所有项目的相关系数都>0．975，这表明目标检测系统标本取值范围合适，可以用相应的直线回归方程评估两检测系统间的系统误差，ALT、GGT在不同医学决定水平处的SE％>1／4CLIA88，临床不能接受，而AST、ALP、CK、LDH、AMY在不同医学决定水平处的SE％≤1／4CLIA88，临床全部可以接受。从这里可以看出：同一标本在自建系统与目标系统问检测结果存在不同程度差异，甚至部分项目临床不能接受，说明保证检测系统的完整是实现检测结果可溯源性的必要条件--，，组成检测系统的任何元素的改变都会引起测定结果的差异

临床检验量值溯源均需最后验证其有效性。验证方法是用参考测量过程和常规测量过程同时分析足够数量的、代表性的、分别取自不同个体的实际新鲜样品。根据国际标准化实验室要求j，检验结果只有直接或间接地溯源到参考方法，才能保证检验结果的准确性和不同实验室检测结果的可比性。在本研究中，目标系统是可溯源到参考方法的原检测系统，这样如果校准成功，自建检测系统也就实现了可溯源至参考系统的目的。本研究用患者新鲜混合血清作为量值传递载体，对自建系统校准物cfas(批号为181440)进行量值传递，确定cfas(批号为181440)在“雅培C8000生化分析仪／上海科华试剂”测定系统上的实际校正值，由表2知道，由cfas(批号为177809)量值传递后的自建系统校准物cfas(批号为181440)用于校止自建系统时，其实际校正值与标示值有较大差异，相对偏倚超过5％的有ALT、GGT、CK、AMY，直接用标示值校正自建系统时，其与目标系统的检测差异较大(如表1所示)，而量值传递并校正后对比分析40份患者新鲜血清，由表3可以看出：自建系统与目标系统间的线性方程a、b值和相关系数r都有不同程度的改善，系统间的偏差也缩小，两系统问检验结果更接近，实现了所有项目的系统间可比性，说明量值传递后的自建系统校准物cfas(批号为181440)(可以称为“自建校准品”)对“自建检测系统”校准成功。即通过量值传递，确定了其新的校准值的cfas(批号为181440)能真实校正自建系统并缩小其与原检测系统间的检测结果的差异，以致达到互认。这样，包括仪器、试剂盒、“自建校准品”、和操作程序，实验室建立了自己的完整检测系统，因此，购买如此性能稳定、足够长期使用的“自建校准品”可提高自建生化检测系统检验结果的溯源性、准确性以及与其他原检测系统的可比性。